層析分離技術(shù)與設(shè)備(編輯修改稿)
2024-08-28 17:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 三、凝膠過濾層析的應(yīng)用 生物大分子物質(zhì)的分離純化 分子量的測(cè)定 分級(jí)分離 溶液濃縮 平衡常數(shù)的測(cè)定 細(xì)胞及顆粒的分離 第 4節(jié) 離子交換層析法 離子交換劑：離子交換劑可以分為三部分：高分子 聚合物基質(zhì) 、 電荷基團(tuán) 和 平衡離子 。 交換原理：根據(jù)離子交換樹脂對(duì)需要分離的各種離子的親和力不同而達(dá)到分離的目的。 一、基本原理 X+ R Y RX+ Y－ + A－ ? RX+ A－ + Y－ 二、離子交換劑類型 離子交換劑的基質(zhì) （ 1）疏水性基質(zhì) ?常用的有聚苯乙烯、聚丙烯酸型離子交換劑 ?機(jī)械強(qiáng)度大、流速快，但具有較強(qiáng)的疏水性，容易引起蛋白的變性。 ?一般常用于分離小分子物質(zhì)，如無機(jī)離子、氨基酸、核苷酸等。 （ 2） 親水性基質(zhì) ?常見的有纖維素（ Cellulose）、球狀纖維素（ Sephacel）、葡聚糖（ Sephadex）、瓊脂糖（ Sepharose）等 ?與水有較強(qiáng)的親和力 ?適合于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。 離子交換劑的電荷基團(tuán) （ 1）陽離子交換樹脂 ?—— 強(qiáng)酸性 ：磺酸基團(tuán) (RSO3H) ?—— 中酸性 ：磷酸根 (PO3H2)、亞磷酸根 (PO2H2) ?—— 弱酸性 ：羧基 (COOH)、酚羥基 (OH) （ 2）陰離子交換樹脂 ?—— 強(qiáng)堿性 ：季胺鹽 [N+(CH3)3] ?—— 中堿性 ：叔胺 [N(CH3)2]、仲胺 (NHCH3 ) 、伯胺 (NH2 ) ?—— 弱堿性 ：伯胺 (NH2)、二乙基氨基乙基 (DEAE) 離子交換劑的形狀 ?纖維狀、微粒狀、珠狀、無孔微球狀、大孔微球狀 第 5節(jié) 親和層析法 概念 ?親和層析是利用待分離的生物大分子和它的特異性配體間具有的特異親和力，使之與雜質(zhì)成分分離的一類特殊層析技術(shù)。 ?具有專一親和力的生物分子對(duì)主要有： 抗原和抗體；酶和底物或輔酶或抑制劑；激素和受體； RNA和其互補(bǔ)的 DNA、糖蛋白 植物凝集素 等。 一、基本原理 親和層析的原理 將具有親和力的兩個(gè)分子中的一個(gè)固定在以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當(dāng)含有混合組份的樣品通過此固定相時(shí)，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒有親和力的無關(guān)組份就隨流動(dòng)相流出，然后改變流動(dòng)組成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來。 + C C C 配基 蛋白質(zhì) 固體載體 應(yīng)用 主要用于生物大分子（包括各種蛋白質(zhì)、抗體、激素、維生素、核酸、病毒、細(xì)胞等）的分離、純化。 二、親和層析介質(zhì) 基質(zhì) （ 1）基質(zhì)的類型與性質(zhì) ?—— 常用的有：纖維素、交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺、多孔玻璃珠
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