【正文】 較大或需快速分離的場合。速度太慢，將增大物質(zhì)的擴散，同樣達不到理想的分離效果。 ?澄清方法：微濾（ 1um以下）、離心（ 10000g） ?大規(guī)模生中有管路系統(tǒng)完成。 ?紫外吸收檢測器用于監(jiān)測蛋白質(zhì)、多肽、核酸等成分的流出。 + C C C 配基 蛋白質(zhì) 固體載體 應用 主要用于生物大分子（包括各種蛋白質(zhì)、抗體、激素、維生素、核酸、病毒、細胞等）的分離、純化。 —— 優(yōu)點就是它的分離范圍很大，排阻極限甚至可以達到 108 —— 不僅可以用于分離一般蛋白，也可以用于分離蛋白多糖、質(zhì)粒、甚至較大的病毒顆粒。常用 Rf來表示。 ? 以后層析法不斷發(fā)展，相繼出現(xiàn)氣相層析、高壓液相層析、薄層層析、親和層析、凝膠層析等。 ? 按操作形式不同分類： 柱層析 ：將固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿一個方向移動而達到分離。 第 2節(jié) 吸附層析技術(shù) 一、基本原理 吸附層析法（液 固色譜法， LSC） 原理： 利用固定相的固體吸附劑表面對不同組分吸附力的大小及洗脫液對它的溶解作用（解吸作用）的差異進行分離。 ? 主要用于蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的測定、核苷及核苷酸的分離純化。一般C6~C8為宜。 （ 4）裝柱操作 ?關(guān)閉層析柱出水口，并裝入 1/3柱高的緩沖液，并將處理好的吸附劑等緩慢地倒入柱中，使其沉降約3cm高。 ?適用：被分離物質(zhì)對固定相的親合力差異不大，其區(qū)帶的洗脫時間間隔（或洗脫體積間隔）也不長。 ?清洗溶液：根據(jù)分離物質(zhì)選擇 ?蛋白質(zhì)類：水、 NaCl溶液、 NaOH溶液等 ?脂類：非離子去污劑溶液、乙醇等 ?核酸類： NaOH溶液、高鹽溶液等 ?內(nèi)毒素及病毒： NaOH溶液、乙醇等 消毒、滅菌和保存 （ 1）消毒和滅菌 ?方法：高壓蒸汽滅菌（未裝柱）、采用消毒試劑（裝柱后） （ 2）保存 ?裝柱后必須濕態(tài)保存：常用乙醇、低鹽緩沖液等。 ?進料量由流量計和閥門控制。否則要重新裝柱。 ?—— 環(huán)氧乙烷基活化：這類方法活化后的基質(zhì)都含有環(huán)氧乙烷基，可以結(jié)合含有伯氨基（ NH2）、羥基（ OH）和硫醇基（ SH）等基團的配體。 ?排阻極限很大，分離范圍很廣，適合于分離大分子物質(zhì)，但分辨率較低。用 Rs來表示。 分配層析 ：利用不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(shù)不同，使之分離。 離子交換層析 ：利用不同組分對離子交換劑親和力的不同。 保留體積和保留時間 ? 保留時間 (retention time， tR)：從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時間。 （三）聚丙烯酰胺 ? 商品名為 BioGel P。 ?② 聚丙烯酰胺的活化：一般有以下三種方式：氨乙基化作用、肼解作用和堿解作用。 （ 2）選柱 ?一般柱子的直徑與長度比為 1:10~50；凝膠柱可以選 1:10