蛋白質(zhì)的分離、純化和表征(1)(參考版)
2025-05-03 06:38本頁面
【正文】 。 靈敏度高 ， 能檢測 1微克蛋白 ， 重復性好 。 蛋白質(zhì)含量測定 Ⅲ 5． 染料結(jié)合法 （ Bradfold法 ） 蛋白質(zhì)能結(jié)合考馬斯亮蘭 G250， 顯藍色 ，595nm比色 。 Folin酚試劑的配制比較復雜 。 2． 紫外吸收法 280nm比色 ， 測定后蛋白質(zhì)溶液還能回收 ，操作簡便 ， 但精確度不高 。 5H2O和 6g酒石酸鉀鈉溶于 500ml水中 ， 在不斷攪拌下 ，加入 300ml 10% NaOH， 稀釋至 1000ml。其中 沉降速度法是經(jīng)典的常用方法。 2． 疏水作用層析：疏水層析介質(zhì)有苯基瓊脂糖 、 辛基瓊脂糖等 ， 蛋白質(zhì)分子通過疏水作用與層析介質(zhì)結(jié)合 ， 通過能減弱疏水作用的洗脫液將不同蛋白質(zhì)分別洗脫下來 。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)電泳 (Electrophoresis)。 在不同的 pH環(huán)境下，蛋白質(zhì)的電學性質(zhì)不同。 ?降低介電常數(shù) ?爭奪水化膜 電泳原理 ? 蛋白質(zhì)在非等電點時所帶總電荷不為 0 ? 分子大小不同，電場中移動速度也不同 蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點。 鹽析的機理 ： 破壞蛋白質(zhì)的水化膜，中和表面的凈電荷 。 三、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則 三、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則 總目標：增加制品純度或比活 ：因動 /植物 /細菌而異 ：采用鹽析 /等電點沉淀 /有機溶劑分級分離等方法 ：采用凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等 根據(jù)溶解度分 等電點沉淀 鹽析（常用硫酸銨） 有機溶劑沉淀 根據(jù)電離性質(zhì)分 電泳 離子交換層析 根據(jù)分子大小分 透析或超濾 離心沉淀 凝膠過濾層析 特異親和力： 親和層析 沉降平衡離心法 沉降速度離心法 四、蛋
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1