蛋白質(zhì)的通性、純化與表征(參考版)
2025-05-04 18:07本頁(yè)面
【正文】 。蛋白分子量大小、分配系數(shù)和洗脫體積三者之間的關(guān)系。 5種蛋白質(zhì)沉淀方法的主要原理（主要破壞蛋白質(zhì)膠體的那種穩(wěn)定因素）。 特定蛋白組分的含量分析 ： 酶和激素等：酶活性或激素活性表示 （ 比活性 ） 其它蛋白：抗原抗體反應(yīng) (western blot) 純度鑒定（均一性） 基本手段 ： 電泳分析：?jiǎn)螚l帶 。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定分子量 沉降分析法測(cè)定相對(duì)分子量 沉降速度：與蛋白質(zhì)的大小、密度、形狀以及溶劑的密度和粘度相關(guān)。 （ 2）等電聚焦電泳 (isoelectric focusing, IEF) 6）親和層析 lgMr ＝ a﹣ bVe 凝膠過濾法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 依靠分子篩效應(yīng)分離蛋白質(zhì)，適應(yīng)球狀蛋白的測(cè)定 蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定 ?SDSPAGE： 在 聚丙烯酰胺凝膠中加入十二烷基硫酸鈉（ SDS）和巰基乙醇，以此凝膠為支持物的電泳 稱為 SDSPAGE。 ?分離機(jī)制： 電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng) + + － － － － + － － － － － 通電 + + － － － － + － － － － － + + － － － － + － － － － － + + － － － － + － － － － － + + － － － － + － － － － － ? 等電聚焦電泳：在凝膠中建立 pH梯度，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)移動(dòng)到其等電點(diǎn)的 pH時(shí)，凈電荷為零，在電場(chǎng)中不再移動(dòng)而聚集。 ? 電泳：帶電顆粒在電場(chǎng)中移動(dòng)的現(xiàn)象。 特點(diǎn) 等電點(diǎn)沉淀法操作十分簡(jiǎn)單，試劑消耗少，給體系引入的外來物也少，是一種有效的蛋白質(zhì)初級(jí)分離方法，尤其對(duì)疏水性較強(qiáng)的蛋白質(zhì)。 4）等電點(diǎn)沉淀 定義 利用蛋白質(zhì)在 pH等于其等電點(diǎn)的溶液中溶解度下降的原理進(jìn)行沉淀分級(jí)的方法稱為等電點(diǎn)沉淀法 。 特點(diǎn) 有機(jī)溶劑沉淀法的 優(yōu)點(diǎn) 在于其分辨率高于鹽析，加入的有機(jī)溶劑易除去，且有機(jī)溶劑密度低，利于沉淀物分離。 原
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