核酸的分離純化ppt課件(編輯修改稿)
2024-11-30 23:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 2. 酚 /氯仿抽提 酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并對核酸酶有抑制作用。 氯仿比重大，能加速有機相與水相分層，減少殘留在水相中的酚，同時氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。 在酚 /氯仿抽提核酸提取液時，需要振搖， 為防止起泡和促使水相與有機相的分離 ，再加上一定量的異戊醇（ 酚：氯：異戊醉 =25： 24： 1） 。 (1）使用注意 酚通常是透明無色的結(jié)晶，如果酚結(jié)晶呈現(xiàn)粉紅色或黃色，表明其中含有酚的氧化產(chǎn)物，例如醌、二酸等。 變色的酚不能用于核酸抽提實驗 ，因為氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵。 (2）安全操作 酚腐蝕性很強，并可引起嚴重的灼傷，操作時應(yīng)戴手套。 使用酚時應(yīng)注意 Home 核酸的沉淀 沉淀是濃縮核酸最常用的方法。 優(yōu)點 ： ①改變核酸的溶解緩沖液； ②重新調(diào)整核酸的濃度； ③去除溶液中某些鹽離子與雜質(zhì)。 核酸沉淀的鹽類及濃度 鹽 貯存液濃度（ mol/L) 終濃度 (mol/L) MgCl2 1 NaAc 3 () KAc 3 () NH4Ac 10 NaCl 5 LiCl 8 當核酸溶液的 pH值大于 4時，核酸分子呈多聚陰離子狀態(tài)，它與 1價或 2價陽離子形成的鹽在許多有機溶劑中不溶解，也不會被有機溶課劑變性。 有機沉淀劑 （ 1）乙醇 優(yōu)點： 對鹽類沉淀少，沉淀中所含跡量乙醇易揮發(fā)除去，不影響以后實驗。 缺點： 需要量大，一般要求低溫操作。 （ 2）異丙醇 優(yōu)點： 需體積小，速度快，適于濃度低、體積大的DNA樣品沉淀。一般不需低溫長時間放置。 缺點 ：
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