細(xì)胞器的分離純化實(shí)驗(yàn)(編輯修改稿)
2025-05-27 05:32 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一般制備離心是指在分離 、 濃縮 、 提純樣品中 ，不必制備密度梯度的一次完成的離心操作 ， 實(shí)驗(yàn)室用低 、 高速離心機(jī)可應(yīng)用于此項(xiàng)技術(shù) 。 臺(tái)式或地面式普通離心機(jī) Back ?高速冰凍離心機(jī) Back 從低速到高速逐級(jí)沉淀分離 ， 使較大的顆粒先在較低轉(zhuǎn)速中沉淀 ， 再用較高轉(zhuǎn)速將原先懸浮在上清液中的較小顆粒分離沉淀下來 ， 從而使各種亞細(xì)胞組分得以分離 。 差速離心法主要用于分離細(xì)胞器和病毒 。 ? 其優(yōu)點(diǎn)是：操作簡單 ， 離心后用傾倒法即可將上清夜與沉淀分開 ， 并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子 。 ? 缺點(diǎn)是： ① 分離效果差 ， 不能一次得到純顆粒；② 壁效應(yīng)嚴(yán)重 ， 特別是當(dāng)顆粒很大或濃度很高時(shí) ，在離心管一側(cè)會(huì)出現(xiàn)沉淀； ③ 顆粒被擠壓 ， 離心力過大 、 離心時(shí)間過長會(huì)使顆粒變形 、 聚集而失活 。 細(xì)胞器沉降順序依次為： 核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、核蛋白體 。 差速離心法： Low speed High speed 差數(shù)離心法 Back 密度梯度離心法： 用具有梯度的介質(zhì)來替換離心管中密度均一的介質(zhì)，使介質(zhì)分為不同的層次，濃度低的在上層，高的在底層。細(xì)胞勻漿加在最上層，隨后離心。這樣，不同大小、形態(tài)、密度的顆粒，就會(huì)以不同的速度向下移動(dòng)，擊中到不同的區(qū)域，可以分
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