【文章內(nèi)容簡介】 料培養(yǎng)瓶皿表面上黏附能力的差異，將異質(zhì)性細(xì)胞懸液接種在培養(yǎng)瓶皿內(nèi)，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育一定時間；使細(xì)胞懸液中黏附能力較強(qiáng)的細(xì)胞先黏附在瓶皿的壁上，然后收集尚未黏附的細(xì)胞或者已經(jīng)黏附的細(xì)胞，再用于種植和培養(yǎng)。這種將黏附較快的細(xì)袍與黏附較慢（或無黏附能力）的細(xì)胞分開并分別收集的處理過程就稱為 差速黏附處理 。 差速黏附處理 常用于分離 細(xì)胞懸液中的 成纖維細(xì)胞 與其它組織細(xì)胞。另外，像 巨噬細(xì)胞 之類的具有強(qiáng)黏附能力的細(xì)胞也常借此方法而與其它黏附能力較差的細(xì)胞相分離。 G10過柱法 葡聚糖（ sephadex）是葡萄糖的聚合物，在水中膨脹時可形成凝膠。葡聚糖 G10凝膠具有極小的微孔，常用于分離生物大分子，但也可用來分離細(xì)胞。 其分離細(xì)胞的 原理 是：利用細(xì)胞的黏附特性，使之黏附于葡聚糖凝膠從而將異質(zhì)性細(xì)胞懸液中的具黏附能力的細(xì)胞去除。 用羰基鐵粉處理，能有效地去除異質(zhì)性細(xì)胞懸液中 具有黏附能力的細(xì)胞。 該法的 基本原理 是：把鐵粉加 入 異質(zhì)性細(xì)胞懸液中后，具有黏附活性的細(xì)胞將黏附于鐵粒子，在器皿外用磁鐵將鐵粒子連同黏附其上的細(xì)胞吸至底部，收獲細(xì)胞懸液，即為去除了黏附細(xì)胞的細(xì)胞制劑。 此法 通常用于 去除免疫細(xì)胞懸液中的 單核／巨噬細(xì)胞 。在此情況下，單核／巨噬細(xì)胞可吞噬鐵粒子，這一特性也有助于將其清除。 尼龍毛 (nylon wool)就是聚酰胺纖維。應(yīng)用尼龍毛柱可從混合白細(xì)胞懸液中獲得富含 T淋巴細(xì)胞的制劑。 其 基本原理 是： B淋巴細(xì)胞和單核／巨噬細(xì)胞易黏附于尼龍毛表面，當(dāng)白細(xì)胞懸液通過尼龍毛柱時， B淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及單核／巨噬細(xì)胞將黏附于柱上，而無黏附能力的 T細(xì)胞則通過柱子，收集流出的細(xì)胞即獲 T淋巴細(xì)胞。 此法 主要用于 從淋巴細(xì)胞中 分離 T淋巴細(xì)胞 和 B淋巴細(xì)胞 或從白細(xì)胞或單個核細(xì)胞中純化或去除 T淋巴細(xì)胞。 根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)志的不同，利用相應(yīng)的抗體特別是單克隆抗體和配體，已經(jīng)建立了多種基于親和原理的細(xì)胞分離純化方法。 從理論上講，根據(jù)表面標(biāo)志的細(xì)胞分離方法應(yīng)該是獲得高純度細(xì)胞群或細(xì)胞亞群的最可靠、最有發(fā)展前途的分離技術(shù)，而實踐也證明的確如此。 ： 免疫溶解法也稱免疫消除法。 當(dāng)補(bǔ)體存在時 ，用抗細(xì)胞某一表面標(biāo)志的特異性抗體與異質(zhì)性細(xì)胞一起孵育，可以使具有該特異性表面標(biāo)志的細(xì)胞溶解。利用這一原理，將待消除細(xì)胞的特異性表面標(biāo)志的抗體和補(bǔ)體加入細(xì)胞懸液或細(xì)胞培養(yǎng)物中，使抗體及補(bǔ)體作用于具相應(yīng)抗原的細(xì)胞并溶解之。 （ panning） ： 是一種在固相表面進(jìn)行親和分離細(xì)胞的技術(shù)，它利用蛋白質(zhì)分子可吸附于聚苯乙烯塑料表面和 抗原一抗體 或 配體一受體 特異性結(jié)合的原理，以聚苯乙烯塑料作為親和劑的不溶性基質(zhì)，將抗體（或抗原）、配體（或受體）蛋白吸附于其表面，加上異質(zhì)性細(xì)胞懸液，帶有相應(yīng)表面抗原或表面受體（或配體）的細(xì)胞將結(jié)合于塑料表面，從而將其從異質(zhì)性細(xì)胞懸液中分離出來（陽性選擇）或除去（陰性選擇）。 ： 凝集素 (lectin)是一類以兩價或多價與糖結(jié)合的非酶非抗體蛋白質(zhì)，能凝集具有一個以上相應(yīng)互補(bǔ)性糖類的細(xì)胞或其它物質(zhì)。細(xì)胞表面能與凝集素結(jié)合的結(jié)構(gòu)稱為 該凝集素的受體 ，通常為膜蛋白，但凝集素是對糖特異的，一般只與糖蛋白或多糖的末端非還原糖基反應(yīng)。幾乎所有的細(xì)胞都存在一到幾種凝集素的受體，而不同類型細(xì)胞往往具有不同凝集素受體。 根據(jù)細(xì)胞表面凝集素受體的不同，可采用不同的凝集素使之凝集而與其它細(xì)胞分離開來。 原則上講，所有細(xì)胞，包括細(xì)菌細(xì)胞及單細(xì)胞原生動物，都可以采用不同的凝集素來進(jìn)行分離純化。 ： 某些細(xì)胞如人 T淋巴細(xì)胞具有異種紅細(xì)胞的受體，在一定的條件下，T淋巴細(xì)胞可與紅細(xì)胞相互識別而結(jié)合，形成一個 T淋巴細(xì)胞被數(shù)個紅細(xì)胞圍繞的現(xiàn)象，在顯微鏡下觀察宛如一支玫瑰花，故形象地稱為玫瑰花環(huán) (rosette)。 ： 流式細(xì)胞儀（ flow cytometer, FCM）是一種將 流體噴射技術(shù)、激光技術(shù)、空氣計數(shù)、 γ 射線能譜術(shù) 及 電子計算機(jī) 等技術(shù)與 顯微熒光光度計 密切結(jié)合的儀器，流式細(xì)胞術(shù)（ flow cytometry）就是應(yīng)用 FCM檢測、分析生物顆粒（包括細(xì)胞）的物理和／或化學(xué)特性或借這些特性進(jìn)行分離純化的技術(shù)。 FCM是隨著計算機(jī)科學(xué)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、單克隆抗體制備、定量細(xì)胞化學(xué)和定量熒光細(xì)胞化學(xué)等方法和技術(shù)的應(yīng)用而日益完善的，其檢測分析對象范圍越來越大，如大的免疫復(fù)合物、病毒、脂質(zhì)體、細(xì)胞器、原核細(xì)胞、真核細(xì)胞以及某些簡單的多細(xì)胞生物，而且對所有生物都普遍適用，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的幾乎所有分支學(xué)科，特別是細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)、藥物學(xué)等的研究。 目前，流式細(xì)胞術(shù)主要用于細(xì)胞的定性、定量研究。 ： 免疫磁性微珠（簡稱免疫磁珠）是以直徑幾個微米的磁性微珠作為載體，將抗體或抗原結(jié)合在此載體上，即成為帶有免疫配基的磁性微珠。 磁性微珠是一種人工合成的、含金屬的小顆粒，由三部分組成： 核心是金屬小顆粒， 核心的外層 均勻包裹一層高分子材料（如聚苯乙烯、聚氯乙烯等）， 最外層 是功能基團(tuán)，如氨基（ — NH2）、羧基（ — COOH2）、羥基（ — OH）等，以便與生物大分子偶聯(lián)。 免疫磁珠分離技術(shù)的基本原理是： 磁珠既可結(jié)合蛋白質(zhì)，又可被磁鐵所吸附，經(jīng)過一定處理將抗體（或抗原）結(jié)合在磁珠上，使之成為抗體（或抗原）的載體；磁珠上抗體（或抗原）與特異性抗原（或抗體）物質(zhì)結(jié)合后，形成抗原一抗體磁珠免疫復(fù)合物；這種復(fù)合物在磁力作用下，發(fā)生力學(xué)移動，使復(fù)合物與其它物質(zhì)分離，從而達(dá)到分離特異性抗原（或抗體）的目的。磁珠與抗體的結(jié)合可能只與抗體蛋白的通性和磁珠的特性有關(guān)，而與不同個體的個性關(guān)系不大，因此磁珠對抗體蛋白的結(jié)合具有普遍意義，從而保證其廣泛的應(yīng)用。 ： 反復(fù)植塊法 (repeated explantation)主要是利用不同細(xì)胞的遷移能力不同，在植塊培養(yǎng)不同時間后，待遷移能力強(qiáng)的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）從植塊遷移出來以后，而將植塊重新種植，使目的細(xì)胞再遷移出來，收獲并用于進(jìn)一步培養(yǎng)。目前，這種處理方法主要是針對植塊內(nèi)成纖維細(xì)胞與目的細(xì)胞向外遷移的速度有較大差別而應(yīng)用的。 反復(fù)植塊法的 優(yōu)點 在于以動物組織植塊為材料，細(xì)胞在取材過程中受損傷的程度低。但 缺點 是純化周期長，細(xì)胞產(chǎn)量低，細(xì)胞純度難以保證。 ： 有絲分裂抑制劑是一類能通過影響 DNA復(fù)制而抑制細(xì)胞分裂的化合物。常用的有阿糖胞苷（ arabinosylcytosine, AraC）、氟尿嘧啶（ fluorouracil, FU）等。在體外培養(yǎng)時，給培養(yǎng)液中加入一定量有絲分裂抑制劑，可以抑制所有細(xì)胞的分裂活動但不影響細(xì)胞的生存和生長。繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，不能進(jìn)行分裂活動的可分裂細(xì)胞將逐漸死亡。于是，培養(yǎng)物中留下相對較純的有絲分裂后細(xì)胞。 體外培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 一、從體內(nèi)生存環(huán)境到體外生長條件 二、體外培養(yǎng)的基本方法和過程 三、體外培養(yǎng)物的生長生物學(xué) 四、細(xì)胞分離與純化 五、細(xì)胞系（株）、細(xì)胞克隆 六、培養(yǎng)物的觀察檢測方法 五、細(xì)胞系（株）和細(xì)胞克隆 從有機(jī)體取得組織、細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)，原代培養(yǎng)物中一般都包含多種細(xì)胞成分。 針對不同的研究目的，需要對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行純化，以獲得成分相對單純的培養(yǎng)物。 建立細(xì)胞系、細(xì)胞株和細(xì)胞克隆以及細(xì)胞周期同步化處理就是不同層次上的細(xì)胞純化過程。 原則上，傳代（繼代）培養(yǎng)的過程就是細(xì)胞系的建立過程。但僅僅經(jīng)過傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)物的細(xì)胞組成還不能達(dá)到完全單一。對某些研究來講，必須在細(xì)胞系的基礎(chǔ)上進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，以篩選細(xì)胞成分單一的 細(xì)胞株 。 （一）細(xì)胞系（株）的建立與鑒定 基