實驗5質(zhì)粒dna的雙酶切(編輯修改稿)
2025-02-16 04:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 NA連接酶的作用而“粘合” ?平頭末端 ： Ⅱ 型酶切割方式的另一種是在同一位置上切割雙鏈，產(chǎn)生平頭末端。例如 EcoRV 的識別位置是： 5’…… GAT’|ATC …… 3’ 3’…… CTA’|TAG …… 5’ 切割后形成兩種片段，片段末端同樣可以通過 DNA連接酶連接起來 ? DNA的純度 ? DNA的甲基化程度 ? 酶切消化反應(yīng)的溫度 ? DNA的分子結(jié)構(gòu) ? 溶液中離子濃度及種類 ? 緩沖液的 pH值 影響限制性內(nèi)切酶活性的因素 雙酶切的兩種酶介紹 ?XhoⅠ 酶（ TaKaRa公司） 識別序列和切割位點： ?EcoRⅠ 酶 （ TaKaRa公司） 識別序列和切割位點： 三、儀器、材料與試劑 ?水浴鍋 ?移液槍和槍頭 ?制冰機 ?浮板 ? RpGEX4T1質(zhì)粒 DNA ?XhoⅠ 酶 ?EcoRⅠ 酶 ? 10 H Buffer ?無菌水 ?小離心管 ? DNA marker 2022（ TaKaRa公司） ? 瓊脂糖 ? 1 TAE ? 10mg/mL溴化乙錠溶液（ EB）（ 度， 20mL膠加 1μL） ? 10 Loading Buffer: 1%SDS/50%Glycerol(甘油 )/ % Bromophenol Blue (溴酚藍 ) 四、實驗步驟 1. 質(zhì)粒 DNA的雙酶切 ?反應(yīng)體系： ?反應(yīng)條件： 溫度37℃ ，酶切 10 H B
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