實驗一質粒dna的提取和鑒定(編輯修改稿)
2025-06-16 07:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 /L葡萄糖， 25mmol/ L T r i s. Cl（）， 10mmol/L EDTA（ ）。 溶液 Ⅰ 可成批配制，每瓶 100ml， 高壓滅菌 15分鐘，儲存于 4℃ 冰箱 ?溶液 I：重懸細菌； ?葡萄糖：比重大，使細菌不易沉淀； ?Tris－ HCl：緩沖體系； ?EDTA：螯合金屬離子； 溶液 Ⅱ ? （ 臨用前用 10mol/LNaOH母液稀釋）， 1％ SDS ?溶液 II—— 破膜，變性基因組 DNA和蛋白質； ?SDS—— 破膜作用，變性蛋白質； ?NaOH—— 破膜，變性基因組 DNA； 溶液 Ⅲ ? 5mol/LKAc60ml， 冰醋酸 ， H2O ， 定容至 100ml， 并高壓滅菌。溶液終濃度為： K+3mol/L， Acˉ5mol/L 。 ?溶液 III—— 中和溶液，復性質粒 DNA； 酚 /氯仿（ 1:1） ?酚 —— 變性蛋白質； ?氯仿 —— 萃取溶液中的酚； 分為兩層，上層為水層，下層為酚氯仿混合液。吸取時不要震蕩。 乙醇 ?無水乙醇（ 2倍體積） —— 沉淀質粒DNA； ?70%乙醇 —— 洗滌質粒 DNA沉淀，除去沉淀中的鹽分； 核酸的定量 ? 260 nm， 1OD值相當于： 雙鏈 DNA濃度為 50?g/ml 單鏈 DNA濃度為 40?g/ml A260/A280 = （ DNA） A260/A280 = （ RNA） 電 泳 Electrophoresis 一、定義 電泳 — 帶電粒子在直流電場中向著電性相反電極移動的現(xiàn)象。 電泳分析技術 — 利用電泳現(xiàn)象進行物質分離的技術。 二、電泳分析技術發(fā)展概況 ? 1809年 發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象 ? 1937年 Tiselius 自由界面電泳 ? 1948年 Wieland 濾紙電泳 ? 1980年 毛細管電泳 (capiliary
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