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正文內(nèi)容

實驗一質粒dna的提取和鑒定(編輯修改稿)

2025-06-16 07:23 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 /L葡萄糖, 25mmol/ L T r i s. Cl(), 10mmol/L EDTA( )。 溶液 Ⅰ 可成批配制,每瓶 100ml, 高壓滅菌 15分鐘,儲存于 4℃ 冰箱 ?溶液 I:重懸細菌; ?葡萄糖:比重大,使細菌不易沉淀; ?Tris- HCl:緩沖體系; ?EDTA:螯合金屬離子; 溶液 Ⅱ ? ( 臨用前用 10mol/LNaOH母液稀釋), 1% SDS ?溶液 II—— 破膜,變性基因組 DNA和蛋白質; ?SDS—— 破膜作用,變性蛋白質; ?NaOH—— 破膜,變性基因組 DNA; 溶液 Ⅲ ? 5mol/LKAc60ml, 冰醋酸 , H2O , 定容至 100ml, 并高壓滅菌。溶液終濃度為: K+3mol/L, Acˉ5mol/L 。 ?溶液 III—— 中和溶液,復性質粒 DNA; 酚 /氯仿( 1:1) ?酚 —— 變性蛋白質; ?氯仿 —— 萃取溶液中的酚; 分為兩層,上層為水層,下層為酚氯仿混合液。吸取時不要震蕩。 乙醇 ?無水乙醇( 2倍體積) —— 沉淀質粒DNA; ?70%乙醇 —— 洗滌質粒 DNA沉淀,除去沉淀中的鹽分; 核酸的定量 ? 260 nm, 1OD值相當于: 雙鏈 DNA濃度為 50?g/ml 單鏈 DNA濃度為 40?g/ml A260/A280 = ( DNA) A260/A280 = ( RNA) 電 泳 Electrophoresis 一、定義 電泳 — 帶電粒子在直流電場中向著電性相反電極移動的現(xiàn)象。 電泳分析技術 — 利用電泳現(xiàn)象進行物質分離的技術。 二、電泳分析技術發(fā)展概況 ? 1809年 發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象 ? 1937年 Tiselius 自由界面電泳 ? 1948年 Wieland 濾紙電泳 ? 1980年 毛細管電泳 (capiliary
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