dna的粗提取與鑒定(編輯修改稿)
2024-08-11 18:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 胞核的 DNA含量豐富，材料易得 實(shí)驗(yàn)原理 ① DNA在 NaCl溶液中的溶解度，是隨著 NaCl的濃度的變化而改變的。當(dāng) NaCl的物質(zhì)的量濃度為 mol／ L時(shí) ,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在 NaCl溶液中的 DNA析出。 ② DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的 DNA。 ③ DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定 DNA的試劑。 實(shí)驗(yàn)材料和用具： 雞血細(xì)胞液（ 5~10ml）；體積分?jǐn)?shù)為 95%的冷酒精溶液（實(shí)驗(yàn)前臵于冰箱內(nèi)冷卻 24h）；蒸餾水；質(zhì)量濃度為 0．１ g/ml的檸檬酸納溶液；務(wù)質(zhì)量的濃度分別為 2mol/L和0． 015mol/L的氯化納溶液；二苯胺試劑。鐵架臺(tái)；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（ 100ml，一個(gè)）；燒杯；（ 100ml，一個(gè)， 50ml、500ml各二個(gè)）；試管（ 20ml，二個(gè)）；漏斗；試管夾；紗布。 課前準(zhǔn)備雞血細(xì)胞液 取質(zhì)量濃度為 0． 1g/ml的 檸檬酸納溶液（抗凝劑） 100ml，臵于 500ml燒杯中。注入新鮮的雞血（約 180ml），同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸納溶液充分混合，以免凝血。將燒杯中的血液臵于冰箱內(nèi)，精臵一天，使血細(xì)胞自行沉淀。（也可以將血液倒入離心管內(nèi)，用 1000r/min（轉(zhuǎn)每分）的離心機(jī)離心 2min，血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí)。 用吸管除去離心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。） ①過(guò)程 ② 檸檬酸鈉作用 防止血液凝固 ③ 作用機(jī)理 檸檬酸鈉能與血漿中的 Ca2+發(fā)生反應(yīng)，生成檸檬酸鈣絡(luò)合物，血漿中游離的 Ca2+大大減少，血液就不會(huì)凝固 . 雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的 DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過(guò)程中為了減少DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細(xì)胞液 . ④注意事項(xiàng) 討論：提取雞血中的 DNA時(shí)，為什么 除去血液中的上清液？ 答：血液分為兩部分，一部分是血漿，一部分是血細(xì)胞，離心后除去的上清液是血漿 . 方法步驟 將制備好的雞血細(xì)胞液 5 mL～ 10mL，注入到 50 mL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水 20 mL，同時(shí)用 玻璃棒 充分?jǐn)嚢?5 min， 使血細(xì)胞加速破裂。 然后，用放有 紗布的漏斗 將血細(xì)胞液過(guò)濾至 500mL。取其濾液。 ① 提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì) 討論： 答：讓細(xì)胞內(nèi)濃度大于周?chē)芤旱臐舛?，?xì)胞會(huì)吸水以至脹破 （ 1）為什么要加入蒸餾水？加入蒸餾水后細(xì)胞會(huì)有什么變化？ （ 2）用玻璃棒攪拌有什
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