20xx人教版高中生物選修一51dna的粗提取與鑒定(編輯修改稿)
2025-01-13 19:51 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 作 制備雞血細(xì)胞液????加檸檬酸鈉，靜置或離心 ↓ 破碎細(xì)胞，釋放 DNA? 加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌 ↓→過(guò)濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。 溶解核內(nèi) DNA???? 加入 NaCl至 2mol/L，同一方向緩慢攪拌 ↓ DNA析出?????? 加蒸餾水至 ，過(guò)濾，在溶解到 2mol/L溶液中 ↓→除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。 DNA初步純化???? 與等體積 95％冷卻酒精混合，析出白色絲狀物 ↓→除去核蛋白、 RNA、多糖等。 DNA鑒定?????? 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色 其它注意事項(xiàng)：在雞血中加入檸檬酸鈉防止凝固；雞血靜置或離心以提高細(xì)胞懸液濃度；使用塑料燒杯；使用尼龍布過(guò)濾；玻棒沿同一方向攪拌；玻棒攪拌要緩慢（細(xì)胞破裂快速攪拌）；玻棒不要碰到燒杯壁；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。為了提高 DNA 純度，在科學(xué)實(shí)驗(yàn)中通常使用的洗滌劑有十六烷基三甲基溴化銨（ CTAB）、十二烷基硫酸鈉（ SDS）。 （三）課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng) DNA的粗提取與鑒定 實(shí)驗(yàn)原理 DNA 在不同濃度 NaCl 溶液中溶解度不同 DNA 與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同 DNA 和蛋白質(zhì)對(duì)酶、高溫和洗滌劑耐受性不同 DNA 與二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng) DNA 粗提取 選擇適宜材料 破碎細(xì)胞 DNA 的溶解和析出 DNA 的純化 鑒定 DNA 與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng) （四）實(shí)例探究 例 1 在 DNA分子的粗提取實(shí)驗(yàn)中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是（ ） A. 稀釋血液、沖洗樣品 B. 使血細(xì)胞破裂，降低 NaCl濃度使 DNA析出 C. 使血細(xì)胞破裂，增大 DNA溶解度 D. 使血細(xì)胞破裂，提取含雜質(zhì)較少的 DNA 解析：在該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，第一次加入蒸餾水的目的是使血細(xì)胞過(guò)度吸水而破裂，以便核物質(zhì)溶解。第二次加入蒸餾水是為了降低 NaCl濃度至 ，因?yàn)榇藭r(shí)的 DNA 溶解度最小，可使 DNA析出 。 例 2 在制備雞血細(xì)胞液的過(guò)程中，加入檸檬酸鈉的目的是（ ） A. 防止凝血 B. 加快 DNA析出 C. 加快 DNA溶解 D. 加速凝血 解析：檸檬酸鈉的作用是利用檸檬酸根離子與血漿中 Ca2+離子結(jié)合成檸檬酸鈉，降低Ca2+離子濃度，使有關(guān)凝血酶活性降低。因此檸檬酸鈉是抗凝血物質(zhì)，防止凝血，有利于雞血細(xì)胞液的制備。 答案： A ☆綜合應(yīng)用 例 3 DNA在 NaCl溶液中溶解度有二重性，隨著 NaCl溶液的變化而變化。 （ 1）請(qǐng)?jiān)谙铝?NaCl 溶液中選出溶解度能使 DNA 析出最徹底的一種（ ）和溶解度 最高
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