實驗一質(zhì)粒dna的提取和鑒定-展示頁
2025-05-23 07:23本頁面
【正文】 NaOH調(diào) pH至 ，加去離子水至總體積 1升，高壓下蒸氣滅菌 20分鐘。 吸除上清液，將管倒置于衛(wèi)生紙上使液體流盡，真空干燥 10分鐘或室溫干燥。 將水相 （ 350uL） 移入干凈 eppendorf管中，加入 2倍體積的無水乙醇 ，振蕩混勻后置于 20℃ 冰箱中 20分鐘，然后4℃ 下 12021g離心 10分鐘。 上清液 （ 450uL） 移入干凈 eppendorf管中，加入 等體積的飽和酚 （ 1:1），充分顛倒混勻， 4℃ 下 12021g離心 10分鐘。 加入新配制的 溶液 Ⅱ 200μl，蓋緊管口，快速溫和顛倒eppendorf管數(shù)次，以混勻內(nèi)容物（千萬不要振蕩），冰浴2分鐘。 棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上數(shù)分鐘，使液體流盡。 實驗步驟 將含有質(zhì)粒 DNA的細菌在 LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。 ? 當用強熱或酸、堿處理時，細菌的線性 染色體 DNA變性 ，而共價閉合環(huán)狀 DNA(Covalently closed circularDNA，簡稱cccDNA)的兩條鏈不會相互分開。 基本思路 1. 培養(yǎng)細菌使質(zhì)粒擴增； 2. 收集和 裂解細菌 ； 3. 分離質(zhì)粒 DNA(有時還要求純化質(zhì)粒 DNA，根據(jù)實驗所需 ) 4. 電泳檢測； 堿裂解法的基本原理 ? 十二烷基磺酸鈉 (SDS) 可使 細胞膜裂解 。 ? 現(xiàn)在常用的質(zhì)粒大多數(shù)是經(jīng)過改造或人工構(gòu)建的，常含抗生素抗性基因，是 重組 DNA技術(shù) 中重要的工具。 F質(zhì)粒 (又稱 F因子或性質(zhì)粒 )、 R質(zhì)粒 (抗藥性因子 )和 Col質(zhì)粒 (產(chǎn)大腸桿菌素因子 )等都是常見的天然質(zhì)粒。 基因工程 移液器和 EP管 質(zhì) 粒 ? 質(zhì)粒主要發(fā)現(xiàn)于細菌、放線菌和真菌細胞中， 獨立于染色體之外的、能自主復(fù)制的雙鏈環(huán)狀 脫氧核糖核酸 物質(zhì)。質(zhì)粒 DNA的提取和純化 鄭 敏 生化與分子生物學(xué)系 分子生物學(xué) ? 從 分子水平 上研究生命現(xiàn)象物質(zhì)基礎(chǔ)的學(xué)科。研究細胞成分的物理、化學(xué)的性質(zhì)和變化以及這些性質(zhì)和變化與生命現(xiàn)象的關(guān)
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