dna提取原理和方法(編輯修改稿)
2025-06-15 10:02 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 作用：廣譜蛋白酶，能在 SDS和 EDTA的存在下保持很高的活性，降解蛋白質(zhì)，將 DNA游離。 4. Add ml Phenol/Chloroform and vortex at top speed for 15 min at RT。 5. Spin at 13,000 rpm for 30 min at RT。 優(yōu)點(diǎn)： 1. 有效變性蛋白質(zhì)； 2. 抑制了 DNase的降解作用。 缺點(diǎn)：能溶解 1015%的水，從而溶解一部分 DNA Phenol： Chloroform： 。 DNA水溶液中殘留的微量酚。 1. 減少蛋白質(zhì)變性操作過(guò)程中產(chǎn)生的氣泡。 2. 有助于分相，使離心后的上層含 DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定。 Isoamyl alcohol： the top aqueous phase to a fresh microfuge tube。 ml Chloroform and vortex at top speed for min at RT。 at 13,000 rpm for 5 min at RT。 經(jīng)酚第一次抽提后的水相中有殘留的酚，由于酚與氯仿是互溶的，可用氯仿第二次變性蛋白質(zhì)，此時(shí)一起將酚帶走。也可以在第二次抽提時(shí)，將酚與氯仿混合（ 1:1）使用。 Chloroform： the top aqueous phase to a fresh microfuge tube, add 50 ml 3M NaOAc (pH=) and ml 100% ethanol, invert several times。 at 13,000 rpm for 5 min at RT。 NaOAc (pH=) : 1. 沉淀核酸，縮短乙醇沉淀的時(shí)間 2. 提供單價(jià)陽(yáng)離子。減少 DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成 DNA鈉鹽沉淀， 100% ethanol 1. 任意比和水相混溶，奪去 DNA周?chē)乃肿?，?DNA失水而易于聚合。 2. 但是加其他比例的乙醇使總體積增大，而 DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而 DNA損失也增大，尤其用多次乙醇沉淀時(shí)，就會(huì)影響收得率。 12. If there is no pellet, place samples in 80186。C for 10 min and spin at 13,000 rpm for 25 min at 4186。C。 13. Wash pellet once with 70% ethanol, air dry。 14. Resuspend DNA in ddH2O. 1. DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解。 2. 基本上，核酸在保存中的穩(wěn)定性，與溫度成反比，與濃度成正比。 DNA的保存 ： ?非基因組 DNA的提取 堿裂解法 密度梯度離心法 煮沸法
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