dna提取及常見問題分析和對策(編輯修改稿)
2025-04-20 04:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除。CTAB提取緩沖液的改進(jìn)配方PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少 DNA中酚的污染；同時它也能和多糖結(jié)合，有效 去除多糖。除蛋白質(zhì)：? 氯仿/異戊醇抽提(氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離；異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡）。? 使用變性劑變性 (）? 高鹽洗滌? 蛋白酶處理除多糖： 高鹽法：用乙醇沉淀時，在待沉淀溶液中加入1/2體積的5M NaCl，高鹽可溶解多糖。 用多糖水解酶將多糖降解。 在提取緩沖液中加一定量的氯苯(1/2體積)，氯苯可以與多糖的羥基作用，從而去除多糖 。除酚類物質(zhì)： 在抽提液中加入防止酚類氧化的試劑：β巰基 加入易與酚類結(jié)合的試劑：(聚乙二 醇)，它們與酚類有較強(qiáng)的親和力，可防止酚類 與DNA的結(jié)合除鹽離子：70％的乙醇洗滌TE中成分的作用 TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase ，可防止DNA發(fā)生酸解稱取樣品，液氮研磨，加入預(yù)熱的(65℃ ) CTAB及β巰基乙醇保溫1h,期間不停的搖均吸取上清液,移至新的離心管中,加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），輕緩顛倒 混勻,10000rpm,10min
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