質(zhì)粒dna的提取與酶切鑒定(編輯修改稿)
2025-06-22 18:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 射儀 ， 凝膠成像儀 、 冰箱 、 制冰機(jī)等； 與 Eppendorf 管、 Tip頭 、燒杯、量筒 試劑： LB培養(yǎng)基 氨芐青霉素貯存液：濃度 50100mg／ mL； 溶液 I: 50mmol/L葡萄糖， 10mmol/L EDTA ()， 25mmol/L TrisHCl ()； 溶液 II: , 1%SDS (現(xiàn)配現(xiàn)用 )； 溶液 III: 乙酸鉀溶液 (3M, pH=)( 60mL的 5mol/L KAc, 冰醋酸， H2O)； RNase A： 10mg/ml； TE緩沖液 : 10mmol/L， TrisHCl, 1mmol/L， EDTA， ； 5 TBE緩沖液： －硼酸， mol/L EDTA, pH ； 10 Loading buffer： 1% SDS, %溴酚蘭， 50％的甘油； 無水乙醇； 70％乙醇； 標(biāo)準(zhǔn)分子量片段； 核酸內(nèi)切酶 EcoR I (TaKaRa)； EcoR I酶解緩沖液 (10 buffer H)； 瓊脂糖； 溴化乙啶（ EB）染色液 (10mg/ml)。 四、堿裂解法小量制備質(zhì)粒 DNA 挑取轉(zhuǎn)化篩選的帶有目的質(zhì)粒的大腸桿菌接種到液體培養(yǎng)基中， 37℃ 震蕩培養(yǎng) 12～ 16小時(shí)； 將 Ep離心管中， 12022 g離心 30 Sec，棄上清液，在吸水紙上扣干； 離心時(shí)間不能太長(zhǎng)，以免影響下一步的菌體懸浮 加入 100?L預(yù)冷的溶液
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