dna提取及常見問題分析(編輯修改稿)
2025-06-15 10:02 本頁面
【文章內容簡介】 NA分子大得多，且染色體 DNA為 線狀分子，而質粒 DNA為共價閉合環(huán)狀分子； ? 當用堿處理 DNA溶液時，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價閉環(huán)的質粒 DNA在回到中性 pH時即恢復其天然構象； ? 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質和細胞碎片結合形成沉淀，而復性的超螺旋質粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過離心將兩者分開。 質粒 DNA－堿裂解法 ? 堿裂解法流程圖 對數(shù)期菌體 溶液 III中和 溶液 I充分重懸 溶液 II裂解 上清液 抽提 離心洗滌 酒精沉淀 干燥溶解 沉淀 質粒 DNA溶液 質粒 DNA－煮沸法 ? 煮沸法原理 ? 染色體 DNA比質粒 DNA分子大得多，且染色體 DNA為 線狀分子，而質粒 DNA為共價閉合環(huán)狀分子； ? 當加熱處理 DNA溶液時，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價閉環(huán)的質粒 DNA在冷卻時即恢復其天然構象； ? 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質和細胞碎片結合形成沉淀，而復性的超螺旋質粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過離心將兩者分開。 細胞器 DNA－差速離心法 ? 差速離心法原理 ? 是利用物質比重的不同分離混合物的一種方法。 ? 將待分離物質置于均勻介質（蔗糖）中，以一定的轉速進行離心，比重大的物質優(yōu)先沉降，比重小的卻處于上層，從而得以分離。 線粒體和葉綠體是生物體內半自主性細胞器，自身可編碼蛋白，它們的 比重和大小一定，因而在同一離心場內的沉降速度也一定，根據(jù)這一原理，常用不同轉速的離心法，將細胞內各種組分分級分離出來。 第一部分： DNA提取方法簡介 第二部分： DNA提取常見問題、 原因分析及其對策 內容 提取常見問題、原因分析及其對策DNA提取的基本步驟 －內容物釋放 、純化 ，并去除雜質 材料準備 ? 最好使用新鮮材料， 低溫保存的樣品材料不要反復凍融 ? 提取血液基因組 DNA時，要選擇有核細胞（白細胞） ? 組培細胞培養(yǎng)時間不能過長，否則會造成 DNA降解 ? 含病毒的液體材料 DNA含量較少，提取前先富集 基因組 DNA的提取 質粒 DNA的提取 ? 使用處于對數(shù)期的新鮮菌體（老化菌體導致開環(huán)質粒增加）
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