人類基因組dna提取(編輯修改稿)
2025-06-18 10:18 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的氫鍵也隨之?dāng)嚅_ ，產(chǎn)生具有 3’ 羥基和 5‘ 磷酸基 的DNA片段 。 四、切割方法 識(shí)別和切割位點(diǎn) 46個(gè)堿基對(duì)且具有 回文序列 的 DNA片段 大多數(shù)酶是錯(cuò)位切割產(chǎn)生 5’ 或者 3‘ 黏性末端 例如： EcoR I 切割后產(chǎn)生 5’黏性末端 5‘ G↓AATTC 3’ 5‘ G AATTC339。 3’ CTTAA↑G 539。 3‘ CTTAA G539。 黏性末端 平末端 有一些酶沿對(duì)稱軸切斷 DNA，產(chǎn)生的末端稱為平端或鈍端 例如 :SmaI 同工異源酶 來源不同的酶，但能識(shí)別和切割同一位點(diǎn) 如 BamH I 和 Bst I(G↓GATCC) 同尾酶 有些限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列不同，但是產(chǎn)生相 同的黏性末端。 如 BamH I（ G↓GATCC ）和 Sau3A I(N↓GATCN) 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析 瓊脂糖凝膠 :天然瓊脂是一種多聚糖 ， 主要由瓊脂糖及瓊脂膠組成 。 瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì) ， 不帶電荷 。瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強(qiáng)酸性多糖 ， 由于這些集團(tuán)帶有點(diǎn)荷 ， 在電場作用下能產(chǎn)生較強(qiáng)的電滲現(xiàn)象 。 什么是瓊脂糖凝膠電泳？ 瓊脂糖凝膠電泳主要是應(yīng)用瓊脂糖凝膠作為支持物的電泳法 ， 借助瓊脂凝膠分子篩作用 ， 核算片段因其分子量或者分子形狀不同 ， 電泳速度有差異而分離 。 這種技術(shù)是基因操作的一種方法 。 瓊脂糖凝膠電泳原理 ?瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中， 帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小 ，這就大大提高了分辨能力 ,同時(shí)也由此造成了經(jīng)過一定時(shí)間的泳動(dòng)后按大小形成的一條“條帶”。其中線狀的 DNA可以通過 。 瓊脂糖凝膠電泳原理 : 核酸分子是 兩性解離分子 ， 在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中 ， 其堿基不解離 ， 而磷酸基團(tuán)全部解離 ， 核酸分子因而 帶負(fù)電荷 ，電泳時(shí)向 正極遷移 ． 使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì) ， 發(fā)揮 分子篩 功能 ， 使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異 ， 從而達(dá)到 分離 的目的 。 核酸分子中嵌入 熒光染料 （ 如 EB） 后 ， 在 紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置 。 瓊脂糖凝膠電泳對(duì)核酸的分離結(jié)果與核酸的分子量 、 分子構(gòu)型和凝膠濃度密切相關(guān) 。 實(shí)驗(yàn)證明 ， DNA片段遷移距離與其分子量的對(duì)數(shù)成反比 。 通過比較標(biāo)準(zhǔn)物與未知片段的移動(dòng)距離便可測出未知片段的大小 。 但當(dāng) DNA分子超過 20kb時(shí) ， 普通瓊脂糖凝膠就很難講
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