【文章內(nèi)容簡介】 utionSeriesforRNaseP（RNaseP的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋序列）窗格中：（儲液中標(biāo)準(zhǔn)品的濃度）字段，然后輸入20000。（單位）字段，然后輸入copiesper181。L。完成SampleDilutionCalculations（樣本稀釋計算）選項卡1）選擇SampleDilutionCalculations（樣本稀釋計算）選項卡。2）單擊DilutedSampleConcentration(10XforReactionMix)（稀釋后樣本濃度）（對于反應(yīng)預(yù)混液為10X）。3）從單位下拉菜單中，選擇ng/181。L（默認(rèn)）。4）查看為樣本稀釋計算的劑量。實驗材料訂購在MaterialsList（材料列表）屏幕上，查看建議用于準(zhǔn)備PCR反應(yīng)板的材料列表?；蛘?，您可從AppliedBiosystemsStore（AppliedBiosystems產(chǎn)品倉庫）訂購所建議的材料。創(chuàng)建購物籃，向購物列表中添加項目，然后登錄以提交您的訂單。您必須具有不受限制的網(wǎng)絡(luò)連接才能訪問AppliedBiosystemsStore（AppliedBiosystems產(chǎn)品倉庫）。1）在AppliedBiosystemsStore（AppliedBiosystems產(chǎn)品倉庫）網(wǎng)站上查找靶檢測套件：。（輸入基因名）字段，輸入RNaseP，然后單擊FindAssay（查找檢測套件）。（發(fā)現(xiàn)檢測套件結(jié)果）對話框中，選擇您的檢測套件。（應(yīng)用檢測套件選擇）。2）完成ExperimentMaterialsList（實驗材料列表）窗格：（顯示）下拉菜單中，選擇AllItems（所有項）（默認(rèn)），然后查看建議的材料。若需要，使用右側(cè)的滾動條查看所有項。3）用于進行定量實驗的Inventoried/MadetoOrder檢測設(shè)計用于配合以下TaqMan174。母液使用：TaqMan174。FastUniversalPCRMasterMix(2?),NoAmpErase174。UNG，250次反應(yīng)，編號4352042TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，200次反應(yīng)，編號4304437TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，2000次反應(yīng)，編號432670810包裝TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，編號4305719TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix,NoAmpErase174。UNG，200次反應(yīng)，編號4324018TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix,NoAmpErase174。UNG，2000次反應(yīng)，編號432661410包裝TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，NoAmpErase174。UNG，編號43240204）靶DNA或cDNA有幾種TaqMan和SYBRGreen試劑可用于定量實驗。174。試劑TaqMan174。FastUniversalPCRMasterMix(2?),NoAmpErase174。UNG，250次反應(yīng)4352042TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，200次反應(yīng)，編號4304437TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，2000次反應(yīng)，編號432670810包裝TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，編號4305719TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix,No，AmpErase174。UNG，200次反應(yīng)，編號4324018TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix,NoAmpErase174。UNG，2000次反應(yīng)，編號432661410包裝TaqMan174。2?UniversalPCRMasterMix，NoAmpErase174。UNG，編號4324020TaqMan174。PCRCoreReagentsKit，200次反應(yīng)，編號N8080228174。Green試劑PowerSYBR174。GreenPCRMasterMix(1mL)，40次反應(yīng)，編號4368577PowerSYBR174。GreenPCRMasterMix(5mL)，200次反應(yīng)，編號4367659PowerSYBR174。GreenPCRMasterMix(105mL)，2000次反應(yīng)，編號4368708PowerSYBR174。GreenPCRMasterMix(50mL)，2000次反應(yīng)，編號4367660SYBR174。GreenPCRMasterMix(1mL)，40次反應(yīng)，編號4344463SYBR174。GreenPCRMasterMix(5mL)，200次反應(yīng)，編號4309155SYBR174。GreenPCRMasterMix(50mL)，2000次反應(yīng)，編號4334973SYBR174。GreenPCRCoreReagents，200次反應(yīng)，編號4304886完成設(shè)計向?qū)б瓿蒁esignWizard（設(shè)計向?qū)В┕ぷ髁鞒蹋榭捶磻?yīng)板布局，然后選擇一個退出選項。1）在ReviewPlateforExperiment（查看實驗的反應(yīng)板）窗口中，查看反應(yīng)板布局。2）單擊SaveExperiment（保存實驗）。3）在SaveExperiment（保存實驗）對話框中，單擊Save（保存）以接受默認(rèn)文件名和位置。示例實驗被保存并關(guān)閉，并且您返回到Home（主頁）屏幕。二、準(zhǔn)備反應(yīng)工作如何為標(biāo)準(zhǔn)曲線實驗準(zhǔn)備PCR反應(yīng)。準(zhǔn)備樣本稀釋在將樣本添加到最終反應(yīng)預(yù)混液之前，執(zhí)行樣本稀釋。采用StepOneTM軟件計算的劑量稀釋樣本。（樣本稀釋計算）根據(jù)儲液中的樣品濃度？ng/181。L，Stepone軟件計算出稀釋劑量。因為在StepOne軟件中，樣本量僅限于反應(yīng)總量的10%，因此需要進行樣本稀釋。反應(yīng)總量為每次反應(yīng)25181。L。根據(jù)“樣本稀釋計算”表稀釋樣本。1）所需材料用于稀釋樣本的稀釋液（TE緩沖液或水）、樣本儲液微量離心管、移液槍、移液槍槍頭、試管振蕩器、離心機2）為每份擬稀釋樣本標(biāo)記一個單獨的微量離心管：PopulationPopulation2等3）將所需劑量的稀釋液添加到每個空反應(yīng)管內(nèi)。（）4）將所需劑量的樣本儲液添加到每個反應(yīng)管內(nèi)。（1181。L）5）振蕩每份稀釋的樣本3至5秒，然后短暫地離心反應(yīng)管。6）將稀釋后樣本置于冰上，直到準(zhǔn)備好反應(yīng)板。準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品稀釋序列采用StepOne軟件計算的劑量準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品稀釋序列。（反應(yīng)預(yù)混液計算）根據(jù)儲液中的標(biāo)準(zhǔn)品濃度？copies/181。L，Stepone軟件計算出劑量。1）所需材料用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液（TE緩沖液或水）、標(biāo)準(zhǔn)品儲液微量離心管、移液槍、移液槍槍頭、試管振蕩器、離心機2）為每份標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)記一個單獨的微量離心管：、。3）將所需劑量的稀釋液添加到每個空反應(yīng)管內(nèi)：（）、（）、（）、（）、（）。4）：，然后短暫地離心反應(yīng)管。，然后短暫地離心反應(yīng)管。5）：。，然后短暫地離心反應(yīng)管。6）：。，然后短暫地離心反應(yīng)管。7）：。，然后短暫地離心反應(yīng)管。8）：。，然后短暫地離心反應(yīng)管。9）將標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上，直到準(zhǔn)備好反應(yīng)板。準(zhǔn)備反應(yīng)預(yù)混液使用StepOne軟件計算的組分和劑量準(zhǔn)備反應(yīng)預(yù)混液。（反應(yīng)預(yù)混液計算）若實驗包括一個以上的靶檢測，則為每個靶檢測單獨準(zhǔn)備反應(yīng)預(yù)混液1）所需材料各反應(yīng)預(yù)混液組分微量離心管、移液槍、移液槍槍頭、離心機2）為反應(yīng)預(yù)混液標(biāo)記一個適當(dāng)大小的反應(yīng)管：ReactionMix。3）將所需劑量的每種組分添加到反應(yīng)管中：母液（）、檢測母液（）、，加上10%，注意：將檢測母液置于冰柜中避光儲存，直到準(zhǔn)備使用。過多暴露在光線下會影響熒光探針。計算中包括額外劑量，以便為