植物基因組dna的提取和定性、定量分析報(bào)告(編輯修改稿)
2024-08-28 19:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 側(cè)和右側(cè)孔內(nèi)。每加完一個(gè)樣品，應(yīng)更換一個(gè)加樣頭，以防污染，加樣時(shí)勿碰壞樣品孔周圍的凝膠面（注意：加樣前要先記下加樣的順序）。 (4) 電泳① 接通電泳槽與電泳儀的電源，DNA片段從負(fù)極（黑色插頭）向正極（紅色插頭）移動(dòng)）。DNA的遷移速度與電壓成正比，但電壓升高使瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低，因此，最高電壓不超過5V/cm。② 當(dāng)溴酚藍(lán)染料移動(dòng)到距凝膠前沿12cm處，停止電泳。③ 紫外燈下觀察瓊脂糖凝膠中的帶（戴手套操作），采用凝膠成像系統(tǒng)拍照保存。：(1) TE對待測DNA樣品按1:20或合適的倍數(shù)稀釋。(2) 開機(jī)，儀器會(huì)自動(dòng)對光路及分析軟件進(jìn)行檢測，待顯示屏上出現(xiàn)“instrument Ready”時(shí)，進(jìn)入核酸測定窗口。(3) 調(diào)零。TE緩沖液注入樣品杯，放入樣品槽，關(guān)閉蓋板。點(diǎn)擊“set ref”鍵，儀器自動(dòng)校正零點(diǎn)。將樣品槽內(nèi)的樣品杯取出，換上待測樣品。(4) 吸70 μL已稀釋的DNA樣品轉(zhuǎn)入石英樣品杯，放入樣品槽，關(guān)閉蓋板。如果樣品很少，可以用57 μL的石英樣品杯。點(diǎn)擊“enter” 鍵，儀器即進(jìn)入分析狀態(tài)。窗口同時(shí)顯示260 nm和280 nm處的光密度（OD值）及A260/A280 nm和A280/A260 nm的比率以及DNA樣品的濃度等。(5) 打開蓋板，取出石英樣品杯，吸出樣液，用超純水清潔石英樣品杯，風(fēng)干后，再加入下一個(gè)待測樣品。(6) DNA純度：以A260/ A280比值來反映。當(dāng)A260 /A280比值，說明樣品存在蛋白質(zhì)或酚等雜質(zhì)，可采用平衡酚/氯仿/異戊醇再抽提除去蛋白質(zhì)或用氯仿或乙醚抽提去除殘留酚，再用無水乙醇沉淀，TE溶解后再測定。當(dāng)A260/A280比值，說明樣品存在RNA污染，可以用RNA酶處理樣品去除RNA。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1. 1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擬南芥基因組DNAC組電泳結(jié)果如圖所示1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測所提取的DNA 5μl樣品，電泳結(jié)果如圖所示有DNA條帶出現(xiàn)，表明已經(jīng)成功提取到了擬南芥的基因組DNA。檢測OD值C1：濃度: ng/OD260/OD280：表明：C1接種DNA質(zhì)量良好。（如下圖所示）C2：濃度:OD260/OD280：表明:C2接種DNA質(zhì)量良好。（如下圖所示）C3：濃度:OD260/OD280：表明:C3接種DNA質(zhì)量良好。（如下圖所示）注意事項(xiàng)：磨樣時(shí)要反復(fù)插入液氮中冷凍，但要避免液氮進(jìn)入管中；取酚氯仿混合液時(shí)要吸取下層；加入酚氯仿和氯仿時(shí)要充分混勻；氯仿抽提后取上清時(shí)不要吸到蛋白層；晾
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