實(shí)驗(yàn)二植物基因組dna的分離純化及rapd擴(kuò)增(編輯修改稿)
2025-06-20 01:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 因差異的結(jié) 果。 2. RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA， 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA)。 3. AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism， 擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度多態(tài) 性 )。 (Specific Amplified Polymorphism, 特異性擴(kuò)增長(zhǎng)度多態(tài) 性 )。 5. 微衛(wèi)星 DNA (Microsatellite Repeats) 也稱為簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)序列 (Simple Sequence Repeat簡(jiǎn)稱 SSR)。 DNA(MinisaTellte DNA)也 稱為數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列 (Variable Numbe of Tandem Repeat簡(jiǎn)稱 VNYR)。 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA， 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA)是 1990年由美國科學(xué)家 的兩個(gè)小組幾乎同時(shí)發(fā)展起來的一種 DNA指紋技術(shù) ， 它是以 DNA為模板 ， 以一 個(gè)隨機(jī)的寡聚核苷酸序列 (10個(gè)堿基 )為引物 ， 通過 PCR擴(kuò)增 ， 產(chǎn)生分子量大 小不連續(xù)的 DNA片段 ， 通過瓊脂糖凝膠電泳來檢測(cè) DNA多態(tài)性 。 DNA多態(tài)性是指 DNA堿基順序的差異性 。 這種差異性不僅存 在于不同的植物之間 ， 也存在于同一種植物的不同個(gè)體之間 。 由于堿基順序的差異 ， 在不同的種或同一個(gè)種的不同個(gè)體之 間 ， 它們的基因組 DNA限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的種類和數(shù)目不同 ， 用 各自 DNA為模板 ， 以一個(gè)隨機(jī)的寡聚核苷酸序列 (10個(gè)堿基 )為引 物 ， 通過 PCR擴(kuò)增 ， 產(chǎn)生分子量大小不連續(xù)的 DNA片段 ， 通過瓊 脂糖凝膠電泳分離和溴化乙錠染色 ， 在紫外檢測(cè)儀下觀察 ， 即 可直接看到這種差異 ， 這就是 RAPD用用于雜交水稻種子純度鑒 定的工作原理 。 PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) )， 即通過引物延伸核酸的某個(gè)區(qū)域而 進(jìn)行的重復(fù)雙向 DNA合成 。 PCR循環(huán)過程有三種不同的事件發(fā) 生： 1. 模板變性 （ 9296℃ ） ； 2. 引物退火 （ 3765℃ ） ； 3. 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶進(jìn)行 DNA合成 延伸 （ 72℃ ） 。 94℃ ， 模板 變性 基因組 DNA 單鏈 DNA 引物退火 引物與模板靶序列互補(bǔ)雜交 一段與模板 DNA互補(bǔ)的新鏈 第二個(gè)循環(huán)結(jié)果 變性、退火、延伸的循環(huán)過程 PCR擴(kuò)增。在第二個(gè)循環(huán) 中，新鏈作為模板參與反應(yīng)，每完成一個(gè)循環(huán)將使目的 DNA擴(kuò)增 一倍， 2535個(gè)循環(huán)后，目的 DNA將達(dá)到 106倍。瓊脂糖電泳、 EB 染色即可得到 DNA指紋圖譜。 PCR反應(yīng)體系 (25?l)： 10?PCR buffer ?l dNTP (10mmol/L) ?l 引物 (15ng) ?l Taq 酶 ?l 模板 DNA(純 DNA15ng，提取 DNA100ng)
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