實(shí)驗(yàn)二植物基因組dna的分離純化及rapd擴(kuò)增(參考版)
2025-05-19 01:52本頁(yè)面
【正文】 。小衛(wèi)星 DNA是 一種重復(fù)的 DNA小序列 ,為十到幾百個(gè)核苷酸 ,在基因組中拷貝數(shù)從 10～ 10000 不等 ,分散或成簇分布 ,多態(tài)性的產(chǎn)生是由于重復(fù)單位間的不平衡交換 ,從而產(chǎn) 生不同的等位基因的結(jié)果。與 RFLP標(biāo)記相比 ,微衛(wèi)星 DNA多態(tài)性較高，但構(gòu)建一張完整的微衛(wèi)星圖譜 ,工作量大，費(fèi)用也高，因 而在實(shí)際中用的較少。 5. 微衛(wèi)星 DNA (Microsatellite Repeats)也稱為簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)序列 (Simple Sequence Repeat簡(jiǎn)稱 SSR)。 SCAR在不同個(gè)體間可能表現(xiàn)為存在 /缺失 ,為顯性標(biāo)記 ,也可能表現(xiàn) 為擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的差異 ,為共顯性標(biāo)記。擴(kuò)增長(zhǎng)度多態(tài)性 )。此外， AFLP標(biāo)記穩(wěn)定性強(qiáng)，重復(fù)性 好，自動(dòng)化程度高，標(biāo)記呈顯性或共顯性，對(duì) DNA的數(shù)量及質(zhì)量要求低， 并且可以通過(guò)控制引物的數(shù)目和種類來(lái)選擇不同的 DNA片段以及擴(kuò)增的 DNA片段的數(shù)目 ,因而在實(shí)際應(yīng)用中有著非常好的前景。 AFLP標(biāo)記所檢測(cè)的多態(tài)性是酶切位 點(diǎn)的變化或酶切片段間 DNA序列的插入與缺失，本質(zhì)上與 RFLP一致。廣義的 AFLP是指所有的經(jīng) PCR反應(yīng)產(chǎn)生的片段長(zhǎng)度的多態(tài)性的總 稱，而狹義的 AFLP專指一種基于 PCR反應(yīng)的 AFLP，這是一種選擇性地?cái)U(kuò)增限 制性片段的方法。其次， RAPD標(biāo)記為顯性標(biāo)記，不能用來(lái)區(qū)別雜合和純合基因 型。 RAPD是一種顯性的遺傳標(biāo)記，與 RFLP標(biāo)記相比， 其標(biāo)記數(shù)量多 ,標(biāo)記的分辨率高，特異性強(qiáng)， DNA用量較少 (50ｎｇ ),對(duì) DNA 的質(zhì)量要求也不及 RFLP標(biāo)記技術(shù)，同時(shí) ,RFLP技術(shù)依賴于 PCR技術(shù) ,因而它具 有快速、方便、高效的特點(diǎn) ,因此常常被廣泛用于基因的快速定位和遺傳作 圖。它是 1990年由美國(guó)科 學(xué)家 同時(shí)發(fā)展起來(lái)的一種 DNA指紋技術(shù)，它是以 DNA為模板，以一個(gè)隨機(jī)的寡聚 核苷酸序列 (10個(gè)堿基 )為引物，通過(guò) PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生分子量大小不連續(xù)的 DNA片段，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)檢測(cè) DNA多態(tài)性。 利用ＲＦＬＰ標(biāo)記 ,可以構(gòu)建連鎖圖譜 ,從而可以進(jìn)行ＱＴＬ區(qū)間定位 ,可以 進(jìn)行標(biāo)記輔助篩選，可以對(duì)主效基因進(jìn)行定位和克隆。 RFLP標(biāo)記的優(yōu) 點(diǎn)在于它的標(biāo)記數(shù)量較大 ,理論上可以布滿整個(gè)基因組； 其次，它的標(biāo)記呈共顯性， 可以區(qū)別純合基因型和雜合基因型，并且標(biāo)記 遵循孟德爾遺傳規(guī)律；另外， RFLP標(biāo)記可靠性強(qiáng)，不受顯隱性關(guān)系、基因 互作、下位效應(yīng)、發(fā)育階段、環(huán)境條件以及基因是否表達(dá)的影響。要檢測(cè)到 RFLP，在提取核 DNA后用限制性內(nèi)切酶酶 解，酶解后的片斷通過(guò)電泳依大小而分開，將這些片斷在變性后轉(zhuǎn)移到固 體支持物如尼龍膜上，然后再用具有放射性標(biāo)記的 DNA探針進(jìn)行雜交，放 射性自顯影后得到 RFLP條帶。 二、分子標(biāo)記種類 1. RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism 即限制性片斷 長(zhǎng)度多態(tài)性 )。瓊脂糖電泳、 EB 染色即可得到 DNA指紋圖譜。 94℃ ， 模板 變性 基因組 DNA 單鏈 DNA 引物退火 引物與模板靶序列互補(bǔ)雜交 一段與模板 DNA互補(bǔ)的新鏈
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