人類基因組dna提取(參考版)
2025-05-17 10:18本頁面
【正文】 謝謝 觀賞 Office Make Presentation much more fun WPS官方微博 kingsoftwps 。 瓊脂糖凝膠電泳操作步驟 ?1 制備瓊脂糖凝膠 ?2. 膠板制備 ?3. 加樣 ?4. 電泳 ? ? 瓊脂糖凝膠電泳的應用 ?檢測提取的 DNA ?設計完成引物，擴增好基因序列，做完PCR后，檢測是否成功。 用 20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止 DNA變性 DNA的上樣 正確的 DNA上樣量是條帶清晰的保證 。 乙醇沉淀可以去除多余的鹽 ， 用酚可以去除蛋白 。 ?注意：觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發(fā)波長 ， 如果激發(fā)波長不對 ， 條帶則不易觀察 ， 會出現(xiàn)條帶模糊的現(xiàn)象 。需要注意的是 Marker的電泳同樣要符合 DNA電泳的操作標準 。 特別是 電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象 DNA電泳一定要使用 DNA Marker或已知大小的正對照 DNA來估計 DNA片段大小 。 電壓和溫度 : 電泳時電壓不應該超過 20V/cm， 電泳溫度應該低于 30℃ ， 對于 巨大的 DNA電泳 ， 溫度應該低于15℃ 。 使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果 。注意：高濃度的膠可能使分子大小相近的 DNA帶不易分辨，造成條帶缺失現(xiàn)象。 瓊脂糖凝膠電泳注意點 選擇合適的電泳方法 ?瓊脂糖凝膠電泳：一般的核酸檢測 ?聚丙烯酰胺凝膠電泳：高分辨率 ?脈沖凝膠電泳： DNA鏈巨大 凝膠濃度 濃度通常在 ～ 2%之間，低濃度的用于大片段核酸的電泳，高濃度的用于小片段分析。 DNA分子在高于等電點的 pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。 普通瓊脂糖凝膠分離 DNA的范圍為 ，利用脈沖電泳 ， 可分離高達 10^7bp的 DNA片段 。 常用 1%的瓊脂糖作為電泳支持物 。 ?蛋白質和核酸 ， 由于 pH的不同帶有不同電荷 ， 且在電場中受力大小不同 ， 導致發(fā)生泳動的速度不同 ， 最終可將其分離開來 。 要有效地分離大小不同的DNA片段 ， 需選用適當的瓊脂糖凝膠濃度 。這種形式的質粒遷移 速率最慢 ，其“松散”的分子形式阻礙了它在瓊脂糖凝膠中的運動。 ③ 開環(huán) DNA： 在質粒 DNA復制過程中，拓撲異構酶 I會在 DNA雙螺旋中的一條鏈中引入一個切口，解開質粒的超螺旋。這就是所謂超螺旋結構，由于其結構致密，它在凝膠中的泳動 速度最快 。 這三種構型的相對遷移速率主要取決于凝膠濃度 ， 同時也受到 電流強度 、 緩沖液離子強度等 的影響 。 1)核酸的分子量 質粒 DNA有三種形式 ? 共價閉環(huán) DNA:常以超螺旋形式存在 ? 開環(huán) DNA:質粒 DNA兩條鏈中有一條發(fā)生一處或多處斷裂，因此可以自由旋轉從而消除張力 ,形成松弛的環(huán)狀分子 ? 線性 DNA:因質粒 DNA的兩條鏈在同一處斷裂而
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