浙江大學(xué)生物化學(xué)甲實(shí)驗(yàn)課件實(shí)驗(yàn)8植物基因組dna的提取(參考版)
2025-01-19 05:59本頁(yè)面
【正文】 ） 植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的純度： OD260/OD280＝ OD230/OD260＝ 樣品純度判斷： ⑴ OD260/OD280 ≈ ，表示為純的 DNA； ⑵ OD260/OD280 ＞ ，表示有 RNA污染； ⑶ OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)、酚等污染。 方法 2： 直接取植物基因組 DNA樣品微量原液（ 1～ 2ul)，用分光光度計(jì)進(jìn)行自動(dòng)測(cè)定出 230nm、 260nm、 280nm處的吸光度值，計(jì)算植物基因組 DNA樣品溶液的DNA的含量以及 DNA樣品的純度。 五、實(shí)驗(yàn)操作方法和步驟 方法 1： 將提取的植物基因組 DNA樣品吸取 20ul，加到新的 5ml離心管中，再加一定量的 ddH2O 或 TE緩沖液（ pH ）稀釋 100倍， 用 （約需 ）或 微量石英比色皿 在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定 230nm、 260nm、280nm處的吸光度。 三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑 實(shí)驗(yàn)材料 植物基因組 DNA樣品 實(shí)驗(yàn)試劑 ⑴ ddH2O； ⑵ TE緩沖液（ pH ）。 ⑶ OD230/OD260的比值應(yīng)在 ，若比值較高說(shuō)明有殘余的鹽和小分子如核苷酸、氨基酸、酚等的存在。 核酸樣品純度判斷的一般標(biāo)準(zhǔn)： ⑴ DNA純度： OD260/OD280≈ ，表示為純的 DNA； OD260/OD280 ＞ ，表示有 RNA污染； OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)、酚等污染。由于 DNA在 260nm處有最大的吸收峰，蛋白質(zhì)在 280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在 230nm處。 當(dāng) OD260＝ 1時(shí)，雙鏈 DNA含量約為 50μg / ml 單鏈 DNA含量約為 37μg / ml RNA含量約為 40μg / ml 寡核苷酸含量約為 30μg / ml （由于底物不同有差異） 核酸樣品 DNA、 RNA含量的測(cè)定： 如 用 1cm光徑石英比色皿 ，用 H2O稀釋 DNA或 RNA樣品 n倍并以 H2O為空白對(duì)照，根據(jù)此時(shí)讀出的 OD260值即可計(jì)算出樣品稀釋前 DNA的含量： DNA（ μg/μl ） =50 OD260讀數(shù) DNA樣品稀釋倍數(shù) /1000 RNA（ μg/μl ） =40 OD260讀數(shù) RNA樣品稀釋倍數(shù) /1000 若樣品不純，則比值發(fā)生變化，此時(shí)無(wú)法用分光光度法對(duì)核酸進(jìn)行定量，可使用 溴化乙錠法 或其他方法進(jìn)行估算。 波長(zhǎng)為 260nm時(shí)， DNA或 RNA的光密度的大小不僅與總含量有關(guān)，也與它們的不同構(gòu)型而有差異。 二、實(shí)驗(yàn)基本原理 核酸 —— DNA和 RNA所含堿基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)（嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)）的共軛雙鍵具
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