【正文】 ? 注意滴定終點(diǎn)的控制，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。 A0247。 ? ? 按下式計(jì)算 100ml全血中所含的血糖質(zhì)量（ mg）。 ? 計(jì)算 ? 肝臟的丙酮含量（ mmol/g） =（ V對(duì)照 V樣品） cNa2S2O3247。 試 劑 錐 形 瓶 編 號(hào) 1號(hào)（樣品） 2號(hào)（對(duì)照） V(1/15 mol/L 液 )/ml 3 3 V()/ml 2 V(肝組織糜 )/ml 2 2 混勻，置于 43℃ 恒溫水浴內(nèi)保溫 V(15%三氯乙酸溶液 )/ml 3 3 V()/ml 2 混勻，靜置 15min，過濾，濾液分別收集于 2支試管中 ? 酮體的測(cè)定 ? 另取 50ml錐形瓶 2只，編號(hào)，并按下表操作。再加 %NaCl溶液至總體積10ml，得肝組織糜。 ? 實(shí)驗(yàn)試劑 %（ m/V）淀粉溶液 %（ m/V）NaCl溶液 、 15%三氯乙酸溶液 10%氫氧化鈉溶液 10%鹽酸溶液 ? ? 標(biāo)準(zhǔn) ? 1/15 mol/L 四、操作步驟與方法 肝糜制備 （ 1）將家兔頸部放血處死，取出肝臟；用%NaCl溶液洗去污血；用濾紙吸去表面的水分。 三、儀器、材料和試劑 實(shí)驗(yàn)儀器 恒溫水浴、微量滴定裝置、解剖用具、玻璃器皿等。反應(yīng)式如下： ? 2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2O ? CH3COCH3+3NaOI→CHI3+CH3COONa+2NaOH ? 剩余的碘，可用標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉滴定。 ? 本實(shí)驗(yàn)用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應(yīng)測(cè)定。酮體為機(jī)體代謝的中間產(chǎn)物。在肝臟內(nèi)，乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成 β 羥丁酸。 二、實(shí)驗(yàn)原理 ? 根據(jù) β 氧化學(xué)說，機(jī)體組織能將脂肪酸氧化生成乙酰輔酶 A。 六、思考題： ? 1．移液管使用時(shí)應(yīng)注意哪些問題 ? 2．全血中除了葡萄糖還有哪些還原性物質(zhì) ? 實(shí)驗(yàn)八 脂肪酸的 β 氧化 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? （ 1）了解脂肪酸的 β 氧化。如血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入 10％硫酸 1～ 2滴，待變?yōu)榘底厣笤贋V。如果由吸管中放出血液的速度太快，會(huì)有大量血液粘在吸管內(nèi)壁，容量不準(zhǔn)，所以一般放出 1ml血液所用的時(shí)間不應(yīng)少于 1min。 A0247。 ? ? 按下式計(jì)算 100ml全血中所含的血糖質(zhì)量（ mg）。第三只血糖管中加2ml蒸餾水。每毫升無(wú)蛋白血濾液相當(dāng)于 。 ? 10％（ m/V）鎢酸鈉溶液 ? ? 動(dòng)物血（家兔心臟取血） 四、操作步驟與方法 先在燒杯中加 （草酸鉀或草酸鈉），從家兔心臟取血 10ml放入燒杯，振蕩搖勻。置于 1000ml容量瓶中，緩慢加入 85%（ V/V）H3PO4225ml，邊加邊搖勻。該混合液在 4℃ 冰箱里可保存數(shù)日，如果暴露于陽(yáng)光下，數(shù)小時(shí)即失效。 ? （ 2） B液：稱取硫酸銅 ，用蒸餾水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度，加幾滴濃硫酸作為保存劑。 ? （ 2）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 用移液管吸取 1%葡萄糖母液 ，放入 100ml容量瓶?jī)?nèi)，然后定容至刻度。 三、儀器、材料和試劑 實(shí)驗(yàn)儀器 分光光度計(jì)、血糖管、奧氏吸管、水浴鍋、表面皿（儀器的選擇在實(shí)驗(yàn)開始前由學(xué)生在預(yù)習(xí)報(bào)告中提出方案后教師審定）。血液中的葡萄糖與堿性硫酸銅溶液共熱，銅離子即被血液中的葡萄糖還原成氧化亞銅，后者又可使鉬酸試劑還原成低價(jià)的鉬藍(lán)（藍(lán)色）。 ? ？ ? 測(cè)定血液中葡萄糖的含量，即測(cè)復(fù)雜組分中一種物質(zhì)的量，根據(jù)生化實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)的原理，可采用分光光度法（比色法）進(jìn)行測(cè)定。 ? （ 2）掌握 FolinWu法測(cè)定血糖含量的原理和方法。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍(lán)色，說明磷酸是否存在。注意溶液是否變成綠色，說明核糖的存在。 （ 2）．核糖 取 1支試管加人水解液 1 mL、三氯化鐵濃鹽酸溶液 2mL和苔黑酚乙醇溶液 0． 2 mL。沉淀可在空氣中干燥。棄去清液。注意要一邊攪拌一邊緩緩傾人。在沸水浴上加熱 30分鐘后，冷卻。 4．酵母粉 四、操作步驟與方法 將 15 g酵母懸浮于 90 mL mol／ L氫氧化鈉溶液中，并在乳缽中研磨均勻。 臨用時(shí)將上述 3種溶液與水按如下比例混合。 （ 3） 10％抗壞血酸溶液 10 g抗壞血酸溶于 100 mL水中，貯棕色瓶保存。 實(shí)驗(yàn)試劑 1．氯化鐵濃鹽酸溶液 2．苔黑酚乙醇溶液 3．定磷試劑 （ 1） 17％硫酸溶液 將 17 mL濃硫酸 (比重 1． 84)緩緩加入到 83mL水中。加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測(cè)出上述組分的存在。 RNA可溶于堿性溶液，在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到 RNA的粗制品。(2)了解核酸的組分 ， 并掌握鑒定核酸組分的方法 。取洗脫液 2滴置小試管中，加入磺柳酸 1滴，如有蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，則有白色混濁或沉淀出現(xiàn)。 5. 收集檢查：每管收集 1ml洗脫液。 3. 洗柱：接通洗脫液，按要求洗柱并調(diào)整好流速。 實(shí)驗(yàn)試劑 10% 磺柳酸；納氏試劑 （ 萘斯特試劑 ） ；蛋白質(zhì)－ (NH4)2SO4溶液；無(wú)離子水 （ 洗脫液 ） 四、操作步驟與方法 1. 溶脹凝膠：用去離子水浸泡 Sephadex G25凝膠 24h以上（中間換一次水）或用去離子水沸水浴溶脹 2h左右。葡聚糖凝膠的商品名稱為 Sephadex，它是葡萄糖通過 α1， 6糖苷鍵形成的葡聚糖長(zhǎng)鏈，與交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷以醚鍵相互交連而成的具有三維空間的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，呈珠狀顆粒。此法可用于測(cè)定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量、樣品的濃縮和脫鹽等方面。L1 鹽酸溶液 95%乙醇 緩沖溶液 1 2 3 1 1 1 — 1 — — — 1 1 1 1 1 — — 五、思考題： ? 1. 雞蛋清為何可做鉛、汞中毒的解素劑？ ? 2．氯化汞為何能做為殺菌劑？ 實(shí)驗(yàn) 五 凝膠過濾法使蛋白質(zhì)脫鹽 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 學(xué)習(xí)凝膠過濾法分離純化物質(zhì)的原理與操作技術(shù) 。 試劑（ ml） 管號(hào) 5%卵清 蛋白溶液 molL1鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。L1醋酸溶液及 mol依下表順序加入試劑： 振搖混勻后，觀察各管有何變化。 依下表順序加入試劑： 將各管混勻 ， 觀察記錄各管情況 ， 然后 ， 放沸水浴中加熱 10min， 注意觀察各管的沉淀情況 ， 最后將第 5號(hào)管分別用 10%NaOH或 10%醋酸中和 ， 觀察并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果 。放置片刻，傾出上清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。 取 1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液 2 ml，再加 3%硝酸銀溶液 1~2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。 取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。 四、操作步驟與方法 1．鹽析：加 5%卵清蛋白溶液 5 ml于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。L1碳酸鈉溶液； molL1鹽酸溶液； mol因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固，蛋白質(zhì)與重金屬離子或某些有機(jī)酸的反應(yīng)都屬于此類。提純蛋白質(zhì)時(shí)，常利用此類反應(yīng)。 ?（ 1）可逆的沉淀的反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來(lái)的溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。 二、實(shí)驗(yàn)原理 ? 在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆粒可因失去電荷和脫水而沉淀。 ? （ 2）了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實(shí)用意義。 ? 物茚三酮反應(yīng)的結(jié)果嗎？試解釋之。若不明顯，可于水浴中微熱。分別按上表加入蛋白質(zhì)溶液、色氨酸溶液和水，然后各加入冰醋酸 2毫升，混勻后傾斜試管，沿管壁分別緩緩加入濃硫酸約 1毫升，靜置。 管 號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 材 料 （滴） 雞蛋清 溶液 4 大豆 提取液 4 指甲 少許 頭發(fā) 少許 % 苯酚 4 % 色氨酸 4 % 酪氨酸 4 濃硝酸 /（滴） 2 4 40 40 4 4 4 現(xiàn)象 乙醛酸反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作 ? 取 3支試管。 黃色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作 ? 向 7個(gè)試管中分別按下表