實(shí)驗(yàn)二植物基因組dna的分離純化及rapd擴(kuò)增-資料下載頁(yè)
2025-05-15 01:52本頁(yè)面
【正文】 AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism，擴(kuò)增片段的長(zhǎng) 度多態(tài)性 )。廣義的 AFLP是指所有的經(jīng) PCR反應(yīng)產(chǎn)生的片段長(zhǎng)度的多態(tài)性的總 稱，而狹義的 AFLP專指一種基于 PCR反應(yīng)的 AFLP，這是一種選擇性地?cái)U(kuò)增限 制性片段的方法。在操作過(guò)程中，往往先提取核 DNA，并用內(nèi)切酶降解，之 后再連接一個(gè)接頭 ,依據(jù)接頭的核苷酸序列和酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物 ,即引物 =接 頭 +酶切位點(diǎn) +2～ 3個(gè)隨機(jī)的核苷酸，之后再進(jìn)行特異性 PCR擴(kuò)增，這種 技術(shù) 將 RFLP的隨機(jī)性與專一性擴(kuò)增進(jìn)行巧妙地結(jié)合，又通過(guò)不同的內(nèi)切酶以達(dá)到選擇的目的，故又稱為選擇性限制片段擴(kuò)增標(biāo)記 (Selectine Restriction Fragment Amplification 簡(jiǎn)稱 SRFA)。 AFLP標(biāo)記所檢測(cè)的多態(tài)性是酶切位 點(diǎn)的變化或酶切片段間 DNA序列的插入與缺失，本質(zhì)上與 RFLP一致。與上 面兩種標(biāo)記技術(shù)相比，由于它結(jié)合 RAPD與 RFLP的特長(zhǎng) ,因而它所提供的基 因組多態(tài)性信息比 RFLP、 RAPD多。此外， AFLP標(biāo)記穩(wěn)定性強(qiáng)，重復(fù)性 好，自動(dòng)化程度高，標(biāo)記呈顯性或共顯性，對(duì) DNA的數(shù)量及質(zhì)量要求低， 并且可以通過(guò)控制引物的數(shù)目和種類來(lái)選擇不同的 DNA片段以及擴(kuò)增的 DNA片段的數(shù)目 ,因而在實(shí)際應(yīng)用中有著非常好的前景。 4 SAP(Specific Amplified Polymorphism, 特異性擴(kuò)增長(zhǎng)度多態(tài)性 )。擴(kuò)增長(zhǎng)度多態(tài)性 )。它 是在 RAPD和 RFLP分析中找到多態(tài)性 DNA片段后，將該片段兩端測(cè)序 ,依 據(jù)所測(cè) DNA序列 ,重新設(shè)計(jì)雙引物進(jìn)行特異性ＰＣＲ擴(kuò)增 ,這種標(biāo)記方法又 稱為序列特異性擴(kuò)增區(qū) (Sequence Characterizal Amplified Region 簡(jiǎn)稱 SCAR)。 SCAR在不同個(gè)體間可能表現(xiàn)為存在 /缺失 ,為顯性標(biāo)記 ,也可能表現(xiàn) 為擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的差異 ,為共顯性標(biāo)記。利用 SAP標(biāo)記可以解決 RFLP標(biāo)記中 PCR擴(kuò)增片段多 ,不易分析結(jié)果及重復(fù)的缺點(diǎn)。 5. 微衛(wèi)星 DNA (Microsatellite Repeats)也稱為簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)序列 (Simple Sequence Repeat簡(jiǎn)稱 SSR)。它是 基因組中二核苷酸、三核苷酸或四核苷酸的簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù) ,由于等位基因間重 復(fù)次數(shù)不同而產(chǎn)生多態(tài)性 ,其檢測(cè)也采用 PCR擴(kuò)增。與 RFLP標(biāo)記相比 ,微衛(wèi)星 DNA多態(tài)性較高，但構(gòu)建一張完整的微衛(wèi)星圖譜 ,工作量大，費(fèi)用也高，因 而在實(shí)際中用的較少。 6. 小衛(wèi)星 DNA (Minisatellte DNA)也稱為數(shù)目可變串 聯(lián)重復(fù)序列 (Variable Numbe of Tandem Repeat簡(jiǎn)稱 VNYR)。小衛(wèi)星 DNA是 一種重復(fù)的 DNA小序列 ,為十到幾百個(gè)核苷酸 ,在基因組中拷貝數(shù)從 10～ 10000 不等 ,分散或成簇分布 ,多態(tài)性的產(chǎn)生是由于重復(fù)單位間的不平衡交換 ,從而產(chǎn) 生不同的等位基因的結(jié)果。小衛(wèi)星 DNA多態(tài)性很高 ,但是由于缺乏探針因而 操作起來(lái)比較繁瑣 ,同時(shí)小衛(wèi)星 DNA分布較集中 ,因此使它們的應(yīng)用受到了限 制。
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