【正文】 應(yīng)板布局或反應(yīng)孔表（實驗）選項卡－為每個打開的實驗顯示一個選項卡。2）如何選擇反應(yīng)孔要在分析屏幕上顯示特定反應(yīng)孔，在ViewPlateLayout（查看反應(yīng)板布局）選項卡上選擇相應(yīng)的反應(yīng)孔，操作如下：，使用SelectWellsWith（選擇反應(yīng)孔類型）下拉菜單：選擇Sample（樣本）、Target（靶）或Task（任務(wù)），然后選擇樣本、靶或任務(wù)名稱。，在反應(yīng)板布局中單擊該反應(yīng)孔。，按住CTRL鍵并單擊、或按住Shift鍵并單擊反應(yīng)板布局中的某反應(yīng)孔并拖移鼠標覆蓋所需的反應(yīng)孔。，單擊反應(yīng)板布局的左上角。3）如何顯示多條曲線使用MultiplePlots（多曲線）屏幕可同時顯示最多4條曲線。要在MultiplePlots（多曲線）屏幕內(nèi)導(dǎo)航：（實驗菜單）窗格中，選擇Analysis（分析）→MultiplePlotsView（多曲線視圖）。，單擊∷Showplotsina22matrix（以22窗格方式顯示曲線）。，單擊∶Showplotsintworows（以兩行顯示曲線）。，單擊‥Showplotsintwocolumns（以兩列顯示曲線）。，從每條曲線顯示上方的下拉菜單中選擇該曲線。查看標準曲線StandardCurve（標準曲線）屏幕顯示指定為標準品的樣本的標準曲線。StepOne軟件根據(jù)標準曲線計算未知靶的數(shù)量。在StandardCurve（標準曲線）屏幕上檢查以下回歸系數(shù)值：?Slope（斜率）/擴增效率斜率/擴增效率值－擴增效率通過使用標準曲線中回歸線的斜率來計算。斜率接近?，即100%PCR擴增效率。影響擴增效率的因素包括：–標準品數(shù)量范圍，為了獲得更準確及更精確的效率測量值，使用大范圍的標準品數(shù)量（5至6個對數(shù)級（105至106倍）。–標準品重復(fù)數(shù)，為了獲得更準確的效率測量值，包括重復(fù)數(shù)以降低移液誤差的影響。–PCR抑制劑－反應(yīng)中的PCR抑制劑可降低擴增效率。?R2值（相關(guān)系數(shù)）R2值表示標準曲線回歸線與標準反應(yīng)的單個CT數(shù)據(jù)點之間的擬合程度。R2值。?CT值閾值循環(huán)(CT)是熒光水平達到閾值時的PCR循環(huán)數(shù)。CT值8且35較理想。CT值8表明反應(yīng)中有太多模板。CT值35表明反應(yīng)中靶的數(shù)量太少；對于CT值35的情況，期望更高的標準偏差。1）從ExperimentMenu（實驗菜單）窗格中，選擇Analysis（分析）StandardCurve（標準曲線）。注意：如果StandardCurve（標準曲線）屏幕中未顯示數(shù)據(jù)，單擊Analyze（分析）。2）在ViewPlateLayout（查看反應(yīng)板布局）選項卡上單擊反應(yīng)板布局的左上角，以在StandardCurve（標準曲線）屏幕上顯示全部48個反應(yīng)孔。3）從Target（靶）下拉菜單中，選擇All（全部）。4）從PlotColor（曲線顏色）下拉菜單中，選擇Default（默認）。5）單擊Show/Hidetheplotlegend（顯示/隱藏曲線圖例）。6）查看標準曲線下面顯示的值。在示例實驗中，靶(RNaseP)的值在可接受范圍之內(nèi)：–斜率為?。–R2值為1。–擴增效率(Eff%)%。7）檢查所有樣本均在標準曲線內(nèi)。在示例實驗中，所有樣本（藍點）均在標準曲線（紅點）內(nèi)。8）檢查CT值：（查看反應(yīng)孔表）選項卡。（分類方式）下拉菜單中，選擇Replicate（重復(fù)）。在示例實驗中，CT值在預(yù)期范圍（8且35）內(nèi)。查看擴增曲線①AmplificationPlot（擴增曲線）屏幕上顯示所選反應(yīng)孔內(nèi)所有樣本的擴增情況。有三種曲線可供選擇：??Rn隨循環(huán)變化－?Rn是PCR運行生成的歸一化熒光信號的量值，且是計算CT所依據(jù)的數(shù)據(jù)。此曲線將?Rn作為循環(huán)數(shù)的一個函數(shù)顯示。您可通過此曲線來識別并檢查不規(guī)則擴增，并查看運行的閾值和基線值。?Rn隨循環(huán)變化－Rn是歸一化報告熒光染料。此曲線將Rn作為循環(huán)數(shù)的一個函數(shù)顯示。您可通過此圖來識別和檢查不規(guī)則擴增。?CT隨反應(yīng)孔變化－閾值循環(huán)(CT)是熒光水平達到閾值時的PCR循環(huán)數(shù)。此曲線將閾值循環(huán)(CT)作為反應(yīng)孔位置的函數(shù)顯示。您可使用此曲線查找異常擴增（異常值）。每條曲線可采用圖形方式查看：線性或log10。②可在AmplificationPlot（擴增曲線）屏幕上查看靶，以檢查：?正確的基線值和閾值正確的基線值和閾值－StepOne軟件自動計算基線值和閾值（基于數(shù)據(jù)顯示典型擴增曲線的假定）。典型擴增曲線包含：（幾何級增長期）。切記！實驗性錯誤（如污染物或移液錯誤）可產(chǎn)生非典型擴增曲線，從而導(dǎo)致StepOne軟件計算出錯誤的基線值和閾值。因此，建議在分析完成后檢查AmplificationPlot（擴增曲線）屏幕，并查看為每個反應(yīng)孔指定的基線值和閾值。?異常值如果您的實驗不符合上述指南，則進行下列故障排除：手動調(diào)整基線和/或閾值忽略反應(yīng)孔1）從ExperimentMenu（實驗菜單）窗格中，選擇Analysis（分析）AmplificationPlot（擴增曲線）。注意：如果AmplificationPlot（擴增曲線）屏幕上未顯示數(shù)據(jù)，單擊Analyze（分析）。2）在AmplificationPlot（擴增曲線）屏幕上顯示RNaseP（示例）反應(yīng)孔：（查看反應(yīng)板布局）選項卡。（選擇反應(yīng)孔）下拉菜單中，選擇Target（靶），然后選擇RNaseP（示例）。3）在AmplificationPlot（擴增曲線）屏幕上：（曲線類型）下拉菜單中，選擇?RnvsCycle（?Rn隨循環(huán)變化）。（標記曲線顏色方式）下拉菜單中，選擇Well（按反應(yīng)孔）。（顯示/隱藏曲線圖例）。4）查看基線值：（圖形類型）下拉菜單中，選擇Linear（線性）。（基線）復(fù)選框，以顯示開始循環(huán)和結(jié)束循環(huán)。在示例實驗中，基線在擴增開始之前設(shè)置。5）查看閾值：（圖形類型）下拉菜單中，選擇Log（對數(shù)）。（靶）下拉菜單中，選擇RNaseP。（閾值）復(fù)選框以顯示閾值。在示例實驗中，閾值位于指數(shù)級擴增階段。6）查找任何異常值：（曲線類型）下拉菜單中，選擇CTvsWell（CT隨反應(yīng)孔變化）。在示例實驗中，無RNaseP異常值。查看反應(yīng)孔表WellTable（反應(yīng)孔表）顯示反應(yīng)板中每個反應(yīng)孔的數(shù)據(jù)，包括：?樣本名稱、靶名稱、任務(wù)和染料?計算的閾值循環(huán)(CT)值、歸一化熒光(Rn)值和量值?注釋?標記查看反應(yīng)孔表以檢查：?數(shù)量值?標記?CT值（包括CT標準偏差）1）從ExperimentMenu（實驗菜單）窗格中，選擇Analysis（分析），然后選擇ViewWellTable（查看反應(yīng)孔表）選項卡。注意：如果反應(yīng)孔表中未顯示數(shù)據(jù)，單擊Analyze（分析）。2）使用（分類方式）下拉菜單，以按特定類別將反應(yīng)孔分類。將反應(yīng)孔按重復(fù)、標記或CT值分類。(注意：一次只能選擇一個類別)（分類方式）下拉菜單中，選擇Replicate（重復(fù)）。軟件將重復(fù)反應(yīng)的反應(yīng)孔分為：陰性對照、標準品和樣本。請注意每個重復(fù)反應(yīng)組內(nèi)的數(shù)量相同。Replicate（重復(fù)）－軟件按重復(fù)反應(yīng)將反應(yīng)孔分為：陰性對照、標準品和樣本。查看Quantity（數(shù)量）列以確保每個重復(fù)反應(yīng)組的數(shù)量值相同。這表明嚴格的精確度。（分類方式）下拉菜單中，選擇Flag（標記）。軟件將反應(yīng)孔分為標記反應(yīng)孔和未標記反應(yīng)孔。無標記反應(yīng)孔。Flag（標記）－軟件將反應(yīng)孔分為標記反應(yīng)孔和未標記反應(yīng)孔。標記表示軟件已在標記反應(yīng)孔內(nèi)找到錯誤。（分類方式）下拉菜單中，選擇CT。軟件將反應(yīng)孔按CT值分為：低、中、高和未確定。CT－閾值循環(huán)(CT)是熒光水平達到閾值時的PCR循環(huán)數(shù)。CT值8且35較理想。CT值8表明反應(yīng)中有太多模板。CT值35表明反應(yīng)中靶的數(shù)量太少；對于CT值35的情況，期望更高的標準偏差。公布數(shù)據(jù)可以下列幾種方式公布實驗數(shù)據(jù)：?將曲線另存為圖像文件?打印曲線?打印反應(yīng)板布局?創(chuàng)建幻燈片?打印報告?導(dǎo)出數(shù)據(jù)