基因組學與后基因組學(編輯修改稿)
2025-08-14 18:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 標記間的連鎖交換情況 ,確定標記間的連鎖關系和遺傳距離。 物理圖譜的構建 （ 1）構建物理圖譜的原因 1）遺傳圖譜有限的分辨率 對于人類或其他高等生物不可能得到大量的子代群體，減數(shù)分裂的后代有限，限制了連鎖分析。 2）遺傳圖譜的精確性不高 染色體上存在重組熱點，影響鄰近區(qū)段的遺傳圖譜的準確性。 （ 2）構建物理圖譜的三條途徑 1）限制性酶切圖譜 識別位點較多的內(nèi)切酶：如 NotⅠ ，其 8個核苷酸出現(xiàn)的頻率為 1/48=1/65536bp，而識別位點為 6個核苷酸的出現(xiàn)頻率為 1/46=1/4094bp. 其酶切位點在基因組中出現(xiàn)頻率低的內(nèi)切酶： Sma Ⅰ 酶切 DNA，每 78kb只有 1個切點。 BssH Ⅱ 酶切 DNA，每 390kb只有 1個切點。 Not Ⅰ 酶切 DNA，每 10Mb 只有一個切點。 2）熒光原位雜交（ Fluorescent in situ hybridization),FISH)：通過熒光標記的探針與DNA分子雜交，雜交信號即探針 DNA在染色體上的圖譜位點。 步驟：取處于有絲分裂中期的細胞制片，將染色體變性成單鏈，在將標記的 DNA探針變性后雜交到染色體上，保溫處理后，顯微鏡下直接觀察。 3）序列標簽位點 利用某一已知序列為標簽的位點（ sequence tagged sites,STS)作探針，與 DNA雜交，繪制物理圖譜。 STS的要求： 已知序列，便于 PCR檢測； 基因組中僅一個位點，無重復。 常用的兩大類型： 特異 DNA序列 表達的序列標簽（ expressed sequence tag,EST),該序列來自 ，其非重復序列可作為 STS。 DNA片段 輻射雜交系：嚙齒類動物細胞中含有另一個生物染色體片段的細胞株。 用 3000rad X 射線處理后，人類染色體出現(xiàn)隨機斷裂，將處理細胞與正常的倉鼠或其他嚙齒類動物細胞融合，斷裂的人類染色體可與倉鼠染色體融合。人類基因組輻射后與缺失倉鼠細胞融合后形成輻照細胞系，能在 HAT培養(yǎng)基上生長的就是含有人類染色體片段的細胞，可用于人類基因組物理圖譜的構建。 （ 3）人類基因組物理圖譜 人類基因組序列開始測定時，已有 45萬個 EST，其中有一些重復序列，經(jīng)計算機分析篩選后得到49625個，各代表一個基因。再從中篩選出 3萬個 EST、2個輻射雜交系庫（分別有 83和 93個細胞株）、 1個有32022個克隆的 YAC文庫，用于構建物理圖譜。 構建物理圖譜的密度為每個標記 183Kb。 EST分布結果表明，基因在染色體上的排列是不均勻的。 將物理圖譜和遺傳圖譜整合而成更加完整的人類基因組圖譜，作為基因組測序的眶架和分析的依據(jù)。 基因組圖譜的應用 基因圖譜的構建除用于進行測序外，還有其他用途： 基因定位； 基因的克隆與分離； 基因組比較分析； 基因功能的預測； 標記
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