【文章內容簡介】 a, Brattleboro, USA )的 CCD〔電荷耦合器件〕照像機 (DHSV1401FC/FM,北京大恒圖像有限責任公司 )作為圖像傳感器 ,在每個PCR循環(huán)的退火階段自動拍攝熒光照片。與之前基于體式熒光顯微鏡的檢測系統相比 ,該系統具有體積小、耗能少、靈敏度高等優(yōu)點。 〔圖〕 第三十二頁，共九十一頁。 實時定量 RTPCR檢測系統示意圖 第三十三頁，共九十一頁。 實時定量 RTPCR焚光檢測系統實物照片 第三十四頁，共九十一頁。 實時定量 RTPCR焚光檢測系統的 Labview控制程序界面 第三十五頁，共九十一頁。 單細胞 miRNA122 RTPCR 檢測：以培養(yǎng)的細胞作為模型樣品。在細胞進入指數生長期時進行細胞傳代。將細胞消化后 ,重懸于 1 mL細胞培養(yǎng)液中。向培養(yǎng)液中參加 uLCalceinAM細胞染色劑 ,在 37176。 C水浴中染色 15 min。細胞染色后 ,使用 PBS(磷酸鹽緩沖液 )溶液清洗三次 ,并重懸于 PBS溶液 (含有BSA〔牛血清蛋白〕 mg/mL)中。采用血球計數板 (上海求精生化試剎儀器有限責任公司 )進行細胞計數 ,并調整細胞懸液濃度。采用熱裂解方式(95176。 C5min)進行細胞破膜。之后進行 PCR 擴增，芯片上 PCR反響的熱循環(huán)設置為 95 176。 C30s,60 176。 C70s?！擦私狻? 第三十六頁，共九十一頁。 數據釆集處理：釆用自編的 Labview程序讀取各個循環(huán)焚光照片上液滴的焚光強度值 ,得到熒光強度隨反響循環(huán)數增加而改變的曲線。建立循環(huán)數 CT與 miRNA122的拷貝數的對數值的標準曲線 〔了解〕 第三十七頁，共九十一頁。 、微流控芯片上大腸桿菌的電化學阻抗檢測方法研究 基于細菌懸浮液的阻抗特性和微流控芯片電化學阻抗檢測技術，采用所構建的微流控芯片電化學阻抗分析系統，以大腸桿菌為樣本，優(yōu)化了擾動振幅、緩沖溶液電導率、掃描頻率和新制大腸桿菌標本靜置時間等參數，對大腸桿菌標本、大腸桿菌標準合成樣本進行電化學阻抗檢測，建立了一種大腸桿菌快速定量檢測方法?！仓馈? 第三十八頁，共九十一頁。 優(yōu)化條件：擾動振幅 500 mV、緩沖溶液電導率為 uS/cm、掃描頻率范圍為 100 Hz1 MHz 的條件下，大腸桿菌的測試范圍為 105～ 10 8CFU / mL，檢出限為 104 CFU / mL。顯微測試說明，在該檢出限下，微流控芯片電化學阻抗分析系統對微管道檢測區(qū)域內 10 個以上大腸桿菌就有明顯響應。將所建立的方法應用于某污水中細菌檢測，結果與國標法根本一致。 〔 了解〕 第三十九頁，共九十一頁。 儀器與試劑： VersaSTAT3 電化學工作站 ( 美國普林斯頓 ) 、 Sension5 電導率儀 ( 美國哈希公司 ) 、 OLYMPUS IX71顯微鏡 ( 日本奧林巴斯公司 ) 、SWCJO 超凈臺 ( 蘇州凈化公司 ) 。 LB 培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂 ( 上海生工 ) 。 甘露醇 ( AR，溫州東升化工 ) 。 KH2PO4( AR，重慶川東化工 ) 等。 緩沖溶液配制 : mol/L 甘露醇溶液為基質，以磷酸鹽緩沖液 ( PBS) 調節(jié)至所需電導率，經 微孔濾膜過濾得緩沖溶液。 大腸桿菌標準合成樣本 : 將大腸桿菌標本適當稀釋得系列大腸桿菌標準合成樣本，并采用平板計數法測定濃度。 細菌樣本 : 以大腸桿菌為主要菌群的某污水池為采樣點，按國家標準方法采集水樣。 〔了解〕 第四十頁，共九十一頁。 試驗方法：芯片上陣列式電極是通過 MEMS 技術在玻璃基片上沉積的電極，對電極間距 k 分別為 130， 110， 90， 70 和 50 um，電極寬 d1為 100 um，相鄰電極間距 d2為 20 um， L 為 1780 um， D 為 1100 um。陣列電極將有效檢測面積增大至 mm2，增加響應靈敏度的同時提高信號均勻性和重現性。蓋片采用 SU8 陽膜制作的帶有微管道網絡的聚二甲基硅氧烷 ( PDMS) 薄膜，微管道深度為 30 um，寬度為 300 um，長度為 15000 um，微管道體積 104 mL。將玻璃基片和蓋片對位粘合，即構成復合式玻璃 PDMS 微流控阻抗檢測芯片。 〔圖〕 第四十一頁，共九十一頁。 微流控芯片電化學阻抗檢測芯片，彭金蘭，重慶大學化學化工學院，分析化學， 第四十二頁，共九十一頁。 芯片上大腸桿菌電化學阻抗檢測條件優(yōu)化：在緩沖溶液電導率為 uS /cm，掃描頻率 ～ 1. 0 10 6Hz，新制大腸桿菌標本靜置 90 min 的條件下，測定不同擾動振幅 ( 50 ～ 900 mV) 下大腸桿菌標本 ( 107CFU / mL) 的阻抗譜，確定擾動振幅。 〔了解〕 第四十三頁，共九十一頁。 擾動振幅優(yōu)化：將大腸桿菌標本靜置 90 min，測定不同擾動振幅 ( 50 ～ 900 mV) 下大腸桿菌標本的阻抗譜 。隨著擾動振幅的逐漸降低，阻抗波動越明顯，尤其是低頻段。研究顯示只要不出現高次諧波，高阻抗系統的擾動幅值可以稍大。因此選擇 500 mV 作為擾動振幅。 〔了解〕 第四十四頁，共九十一頁。 不同擾動振幅下細菌標本阻抗檢測 lg|Z|lgf 關系圖 第四十五頁，共九十一頁。 芯片上大腸桿菌電化學阻抗檢測定量分析：在優(yōu)化條件下，對系列濃度 ( 105～ 108 CFU / mL)大腸桿菌標本進行電化學阻抗檢測，以大腸桿菌濃度 ( C) 為橫坐標，以某頻率下阻抗 ( |Z| ) 為縱坐標，建立細菌標本 | Z | 與 C 的關系曲線。由于高頻段相關系數較低，通過綜合實驗分析，采用 1. 0 102～ 1． 0 104Hz 頻率段的阻抗數據建立定量曲線?！擦私狻? 第四十六頁，共九十一頁。 細菌標本懸浮液阻抗檢測 |Z|C 定量曲線 第四十七頁，共九十一頁。 以某污水為分析樣本，進行采樣、計數、預處理及檢測。其檢測方法是在芯片管道兩端連接軟支管道，使緩沖溶液 ( uL) 充滿管道，液差驅動大腸桿菌懸浮液進入微管道，大腸桿菌懸浮液進樣量約 5 uL，流速約 1 uL/min。 電化學測試儀由引線 1 和 2 連接微流控芯片，對樣本進行電化學阻抗檢測 。 數據采集系統采集并保存數據。然后與標本懸浮液阻抗與濃度之間的定量曲線關系進行比照，定量分析。 相比于現行國標方法，本方法只需經簡單膜過濾即可進行檢測， 2 min 可以完成單樣本檢測， 20 min內即可完成污水中細菌檢測分析。 〔了解〕 第四十八頁，共九十一頁。 、集成酶微反響器微流控芯片葡萄糖電化學檢測 概述：臨床上所稱的血糖通常是指血液中的葡萄糖。正常人的血糖濃度在神經系統的調節(jié)下保持相對恒定的水平。血糖濃度如果超過正常水平 ,表示體內糖的利用發(fā)生紊亂 。血糖濃度如果過低 ,那么中樞神經系統會發(fā)生嚴重的功能障礙 ,出現昏迷 ,即低血糖昏迷。本實驗將葡萄糖氧化酶直接固定在微流控芯片通道的內壁上 ,使酶反響和電極反響過程都集中的微流控芯片通道中進行 ,實現反響器的集成化 ,并由于芯片外表較粗糙 ,可增加酶的擔載量 ,提高了該生物傳感器的靈敏度。〔了解〕 第四十九頁，共九十一頁。 儀器： XMC5400程序升溫控制儀 (福建東輝智能儀器有限責任公司 )。 SX2410箱式電阻爐 (沈陽市電爐廠 )。 微量注射泵 (Bioanalytical Systems