大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞(編輯修改稿)
2024-09-11 21:21 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 性的酶。所以，有重組質(zhì)粒的菌落為白色，而沒有重組質(zhì)粒的菌落為藍(lán)色。 重組 DNA轉(zhuǎn)化細(xì)菌過程示意圖 3． 儀器 、 材料和試劑 無菌超凈臺(tái) ， 電熱恒溫水浴 ， 分光光度計(jì) ， 離心機(jī) ， 移液器 ， 微型離心管等； 菌株： DH5α 質(zhì)粒： pBluscript KS+DNA 片段的重組質(zhì)粒以及 pBluscript KS 空質(zhì)粒； LB培養(yǎng)基；含抗菌素的 LB平板培養(yǎng)基 （ 氨芐青霉素 ， 濃度 50100181。g／ mL， Xgal 2048181。g/ml, IPTG 100 181。g/ml。 一般將抗生素 、 Xgal和 IPTG配制成 1000?儲(chǔ)備液 ， 用時(shí)按培養(yǎng)基的量再加入 ） ； 預(yù)冷 CaCl2溶液 （ ／ L） 4．操作步驟 1）大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 (CaCl2法 ) （ 1） 從新活化的 DH5α菌平板上挑取一單菌落 ， 接種于 3～ 5ml LB液體培養(yǎng)中 ，37℃ 振蕩培養(yǎng) 12h左右 ， 直至對數(shù)生長期 。將該菌懸液以 1:100～ 1:50轉(zhuǎn)接于 100ml LB液體培養(yǎng)基中 ， 37℃ 振蕩擴(kuò)大培養(yǎng) ， 當(dāng)培養(yǎng)液開始出現(xiàn)混濁后 ， 每隔 20～ 30min測一次OD600nm， 至 OD600nm≤； （ 2） 每組取培養(yǎng)液 3個(gè) 2ml轉(zhuǎn)入 2ml離心管中 ， 在冰上冷卻 2030min， 于 4℃ ， 4000r／ min離心 10min（ 從這一步開始 ， 所有操作均在冰上進(jìn)行 ， 速度盡量快而穩(wěn) ） ； （ 3 ） 倒凈上清培養(yǎng)液 ， 用 1ml 冰冷的
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