實(shí)驗(yàn)1-大腸桿菌的培養(yǎng)與分離(編輯修改稿)
2024-09-11 22:00 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 包器材 滅菌 菌種擴(kuò)增 倒平板 接種、劃線 培養(yǎng) 觀察記錄 實(shí)驗(yàn)流程 二、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)操作 （一）培養(yǎng)基的配置與滅菌 取 2個(gè) 250ml的三角瓶中分別裝入 50mlLB液體培養(yǎng)基和 50mlLB固體培養(yǎng)基（剛配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮紙包裝后高壓鍋滅菌 15min。 LB液體培養(yǎng)基 —— 細(xì)菌的擴(kuò)大培養(yǎng) LB固體培養(yǎng)基 —— 細(xì)菌的劃線分離 封口膜：既通氣又不使菌進(jìn)入 （二）倒平板 滅菌后的培養(yǎng)基在 無(wú)菌操作臺(tái) 上倒入 4個(gè)培養(yǎng)皿中，倒后立即置于 水平 位置上，輕輕晃動(dòng)，使培養(yǎng)基鋪滿平皿底部，待凝，使之形成平面 注意事項(xiàng)： ，需要冷卻到 60 ℃ 左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板 ：無(wú)菌操作臺(tái)用超凈紫外燈和過(guò)濾風(fēng)滅菌；桌面及人手用酒精棉球消毒 夾住封口膜 ,另外三指持三角瓶 ,左手拿培養(yǎng)皿并打開(kāi)上蓋的一邊 ,在 酒精燈火焰旁操作 . ， 灼燒滅菌 ，要將 平板倒置 ,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染 . （三）大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng) 將斜面上培養(yǎng)的大腸桿菌菌種接種到 滅菌后的液體培養(yǎng)基 中 ,使其在 37℃ 搖床培養(yǎng) 12小時(shí)。 注意事項(xiàng) : 從斜面上用接種環(huán)取菌 。 接種環(huán)要 用酒精燈 灼燒 滅菌 ,冷卻后方能取菌 。 . 菌種擴(kuò)增 ?搖床震蕩培養(yǎng) 12h（于 LB液體培養(yǎng)基中） 本圖來(lái)自十一學(xué)校 （ 四 ）大腸桿菌的劃線分離 分離方法 :劃線分離法和涂布分離法 劃線分離法 無(wú)菌操作臺(tái)上用接種環(huán)取菌后在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線 . 不能使用脫脂棉，否則容易吸水，造成污染。 一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的； 二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。 （ 四 ）大腸桿菌的劃線分離 注意事項(xiàng) : 只蘸一次菌液 ,但要在培養(yǎng)基不同位置 連續(xù)劃線多次 . 首尾不能相接 ,培養(yǎng)皿 倒置培養(yǎng) 12~24h
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