大腸桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)(編輯修改稿)
2025-06-22 06:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 lac O SD/ATG GST 插入位點 TGA lacP 融合肽： GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶） GST融合蛋白用 Glutathione Sepharose親和層析柱 分離純化。 （ 3）產(chǎn)物提純 （ 2）組成結(jié)構(gòu) （ 4）產(chǎn)物分離 用凝血酶或 Xa因子可以把外源蛋白從 GST上切下來。 柱（ column） GST 外源蛋白 凝血酶 外源蛋白 柱（ column） GST GST 洗脫 柱（ column） 可再利用 pGEX 插入?yún)^(qū)： pGEX1?T CTG GTT CCG CGT GGA TCC CCG GAA TTC ATC GTG ACT GAC TGA CGA Leu Val Pro Arg Gly Ser Pro Glu Phe Ile Val Thr Asp EcoR I BamH I 凝血酶 CTG GTT CCG CGT GGA TCC CCG GGA ATT CAT CGT GAC TGA CTGACG Leu Val Pro Arg Gly Ser Pro Gly Ile His Arg Asp EcoR I BamH I 凝血酶 ATC GAA GGT CGT GGG ATC CCC GGG AAT TCA TCG TGA CTGACTGAC Ile Giu Gly Arg Gly Ile Pro Gly Asn Ser Ser EcoR I BamH I Xa因子 pGEX2X的插入?yún)^(qū)： pGEX3X的插入?yún)^(qū)： Sma I Sma I （ 5）其他融合蛋白系統(tǒng) Histag（組氨酸標(biāo)簽）： 在外源多肽的 N端或 C端接上 6個組氨酸（ His）。 Histag能與 Ni2+柱 結(jié)合，但很容易被EDTA（或咪唑溶液）洗脫下來，可以純化蛋白質(zhì)。 （ 2） 35區(qū)與 10區(qū)之間的距離 （ 1） 35區(qū)和 10區(qū)的堿基順序 五、影響外源基因表達(dá)效率的因素 1. 啟動子的結(jié)構(gòu)對表達(dá)效率的影響 5’TTGACA TATAAT 一
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