第五講-dna的提取原理及提取技術(shù)(編輯修改稿)
2024-09-11 20:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ， 12022 r/min離心 20min，棄上清，沉淀在空氣中晾干，溶于 TE中， 20℃ 保存?zhèn)溆谩?DNA提取技術(shù)提取技術(shù)一、染色體 DNA的提取 CTAB法 （ hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化銨） SDS法 （十二烷基磺酸鈉， Sodium dodecyl sulfate, 簡稱 SDS） 二、非染色體 DNA的提取 質(zhì)粒 DNA的提取 堿裂解法 煮沸法 線粒體、葉綠體 DNA的提取 差速離心結(jié)合 SDS裂解法CTAB法 （植物 DNA提取經(jīng)典方法）原理： CTAB（ hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化銨），是一種陽離子去污劑，可溶解細胞膜，并 與核酸形成復(fù)合物。 該復(fù)合物在高鹽溶液中（ NaCl）是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽的濃度到一定程度（ mol/L NaCl）時從溶液中沉淀。 通過離心就可將 CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白、多糖類物質(zhì)分開，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。CTAB提取緩沖液的配方 組 份 TrisHCl （） EDTA （） NaCl CTAB β巰 基乙醇 終濃 度 100 mM 20 mM 2%(W/V) %（ V/V） 使用前加入216。 TrisHCl （ ） 提供一個緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞； Tris (三羥甲基氨基甲烷 )216。 EDTA螯合 Mg2+或 Mn2+離子，抑制 DNase活性；216。 NaCl 提供一個高鹽環(huán)境，使 DNP充分溶解，存在于液相中；216。 CTAB溶解細胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離；216。 β巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除CTAB提取緩沖液的改進配方216。 組 份 TrisHCl （ ） EDTA （ ） NaCl CTAB PVP40 β巰 基乙醇 終濃 度 100 mM 20 mM 3%(W/V) 5%(W/V) 2%（ V/V） 使用前加入v PVP（ 聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一
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