1質粒dna的提取、酶切與電泳(編輯修改稿)
2024-08-31 07:13 本頁面
【文章內容簡介】 濃鹽溶液（如 NaCl） 核酸 蛋白質加入 NaCl后，破壞靜電吸力，使氫鍵破壞，核蛋白解聚； 2 加入 SDS SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外，還具有使核酸從蛋白質上游離出來的功能； 3 酚 /氯仿抽提 酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并對核酸酶有抑制作用。 氯仿比重大，能加速有機相與水相分層，減少殘留在水相中的酚，同時氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。 在酚 /氯仿抽提核酸提取液時，需要振搖， 為防止起泡和促使水相與有機相的分離 ，再加上一定量的異戊醇（ 酚：氯：異戊醉 =25： 24： 1） 。 1）使用注意 酚通常是透明無色的結晶，如果酚結晶呈現粉紅色或黃色，表明其中含有酚的氧化產物，例如醌、二酸等。 變色的酚不能用于核酸抽提實驗 ，因為氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵。 2）安全操作 酚腐蝕性很強，并可引起嚴重的灼傷，操作時應戴手套。 使用酚時應注意 Home （三）核酸的沉淀 沉淀是濃縮核酸最常用的方法。 優(yōu)點 ： ①改變核酸的溶解緩沖液； ②重新調整核酸的濃度； ③去除溶液中某些鹽離子與雜質。 1 核酸沉淀的鹽類及濃度 鹽 貯存液濃度（ mol/L) 終濃度 (mol/L) MgCl2 1 NaAc 3 () KAc 3 () NH4Ac 10 NaCl 5 LiCl 8 2 有機沉淀劑 （ 1）乙醇 優(yōu)點： 對鹽類沉淀少，沉淀中所含跡量乙醇易揮發(fā)除去，不影響以后實驗。 缺點： 需要量大，一般要求低溫操作。 （ 2）異丙醇 優(yōu)點： 需體積小，速度快，適于濃度低、體積大的DNA樣品沉淀。一般不需低溫長時間放置。
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