質(zhì)粒提取及瓊脂糖凝膠電泳(編輯修改稿)
2025-05-27 12:03 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 sc DNA） 超螺旋 （ 2） .開(kāi)環(huán) DNA (open circle DNA, oc DNA) 開(kāi)環(huán) DNA （ 3） .線形 DNA（ linear circle DNA， lc DNA) 與本實(shí)驗(yàn)有關(guān)的兩種質(zhì)粒 (作為目的基因供體 ) 4363bp (作為載體） 實(shí)驗(yàn) 質(zhì)粒 DNA提取 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 。 。 堿裂解法提取質(zhì)粒 原理 堿裂解法提取質(zhì)粒 DNA的原理是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性染色體 DNA的 分子大小和結(jié)構(gòu)不同 利用二者之間 變性和復(fù)性的差異 來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。 強(qiáng)堿及機(jī)械剪切力 ①染色體 DNA斷裂成小片段線性 DNA（機(jī)械剪切力 ) ②染色體氫鍵斷裂，雙鏈解離變性（強(qiáng)堿）； ①質(zhì)粒 DNA保持閉合環(huán)狀； ②雙鏈 DNA并未完全分離（強(qiáng)堿） 。 酸中和至中性 變性的染色體 DNA與變性的蛋白質(zhì)以及細(xì)胞碎片凝聚成網(wǎng)絡(luò)狀大分子不溶性沉淀物 質(zhì)粒 DNA又恢復(fù)天然構(gòu)型，溶解在上清液中 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA原理 帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度 由于電場(chǎng)力的作用，使帶電顆粒在電場(chǎng)中向一定方向泳動(dòng)；此顆粒在泳動(dòng)過(guò)程中還受到一個(gè)相反方向的摩擦力 (f υ )阻擋；當(dāng)這兩種力相等時(shí)，顆粒則以均勻速度 (υ )向前泳動(dòng) fqEfFv ???式中 f為摩擦系數(shù)。根據(jù) Stoke公式，阻力大小取決于帶電顆粒的大小、形狀以及所處介質(zhì)的黏度，即 式中 f—— 阻力，牛頓； r—— 粒子半徑，米； η —— 介質(zhì)粘度，牛頓 秒 /米 2； ?? ??? rf 6??? ???????6qEfqEfFv從公式看出，帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度與 電場(chǎng)強(qiáng)度
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