質(zhì)粒酶切鑒定ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-22 00:15 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 用屬名的頭一個字母和種名的頭兩個字母表示寄主菌的物種名稱，如 E. coli 用 Eco表示，所以用斜體字。v 用一個字母代表菌株或型，如流感嗜血菌Rd菌株用 d，即 Hind。v 如果一種特殊的寄主菌株，具有幾個不同的限制與修飾體，則以羅馬數(shù)字表示，如HindⅠ , HindⅡ ， HindⅢ 等。5) 影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素(1) DNA的純度；(2) DNA的甲基化程度；(3) 酶切消化反應的溫度；(4) DNA的分子結(jié)構(gòu)；(5) 溶液中離子濃度及種類；(6) 緩沖液的 pH值。瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是利用瓊脂糖溶化再凝固后能形成帶有一定孔隙的固體基質(zhì)的特性，其密度取決于瓊脂糖的濃度。在電場的作用下及中性 pH的緩沖條件下帶負電的核酸分子就可以向陽極遷移。影響 DNA在瓊脂糖中遷移率的因素： DNA分子的大小、 DNA的構(gòu)象、電壓、電場方向、堿基組成、嵌入的燃料以及電泳緩沖液的組成。瓊脂糖凝的濃度影響給定大小的線狀DNA的遷移率，因此采用不同濃度的凝膠可以分離不同大小范圍的 DNA片段。 % 的瓊脂糖凝膠能很好地分辨125kb的片段； % 的瓊脂糖凝膠用于分辨較大片段的 DNA (20100kb）； 對于小片段的 DNA() 可用% 或更高濃度的凝膠進行分離。不過，以上這些并不是絕對的，因為有時我們需要同時分離多種分子量相差較大的片段，因此所用瓊脂糖凝膠的濃度要視情況而定。EB：即 3,8二氨基 5乙基 6苯基菲錠溴鹽 , (Ethidium Bromide)。 它能夠插入 DNA分子中的堿基對之間而與 DNA結(jié)合。由于 EB分子 的插入，在紫外光的照射下，凝膠電泳中的 DNA條帶呈現(xiàn)出 紅色熒光，易于檢測?？梢詸z測 10ng 的 DNA。注意： EB是一種誘變劑，操作時一定要注意安全操作，必須戴塑料或乳膠手套 。3. 實驗材料與儀器? 質(zhì)粒 pCMVMycT10? NEB 標準分子量片段 (1kb DNA Ladder)? EcoR1 和 Xho1 核酸內(nèi)切酶（ Takara）? EcoR 1和 Xho 1酶 解緩沖液 (10H buffer)? 瓊脂 糖? TBE或 TAE緩沖液 (10)? 溴化乙啶染色液 (10mg/ml)? 上樣液 (6) ： % 溴酚蘭， 40％ (W/V)蔗糖 水溶液或 30％的甘油。Ins
范文總結(jié)相關推薦
鄂ICP備17016276號-1