質粒提取方法ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 18:24 本頁面
【文章內容簡介】 加水定容至 100ml, 分裝后高壓滅菌 ,儲存于 4℃ 冰箱。 溶液 Ⅰ ： 50 mmol/L 葡萄糖， 25 mmol/L ()， 10mmol/L EDTA ()。 溶液 Ⅰ 可成批配制 ,每瓶 100ml,高壓滅菌 15分鐘 ,儲存于 4℃ 冰箱。 溶液 Ⅱ ： mol/L NaOH (臨用前用 510mol/L NaOH母液稀釋 )， 1％ SDS。 溶液 Ⅲ ： 5 mol/L KAc 60ml，冰醋酸 ， H2O ，定容至100ml, 并高壓滅菌。溶液終濃度為 : K+ 3mol/L, Acˉ 5mol/L。 RNA酶 A母液：將 RNA酶 A溶于 10mmol/L TrisCl(), 15mmol/L NaCl中 ,配成 10mg/ml的溶液 ,于 100℃ 加熱 15分鐘 ,使混有的 DNA酶失活。冷卻后用 eppendorf管分裝成小份保存于 20℃ 。 飽和酚：市售酚中含有醌等氧化物 ,這些產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂及導致 RNA和 DNA的交聯 ,應在 160℃ 用冷凝管進行重蒸。重蒸酚加入 ％的 8羥基喹啉 (作為抗氧化劑 ),并用等體積的 Cl ()和 TrisCl()緩沖液反復抽提使之飽和并使其 pH值達到 ,因為酸性條件下DNA會分配于有機相。 1 氯仿 :按氯仿 :異戊醇＝ 24:1體積比加入異戊醇。氯仿可使蛋白變性并有助于液相與有機相的分開 ,異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫。 按體積/體積＝ 1:1混合上述飽和酚與氯仿即得酚 /氯仿 (1:1)。酚和氯仿均有很強的腐蝕性，操作時應戴手套。 1 TE緩沖液： 10 mmo/L TrisCl ()， 1 mmol/L EDTA ()。高壓滅菌后儲存于 4℃ 冰箱中。 1 STET： mol/L NaCl， 10mmol/L TrisCl()， 10 mmol/L EDTA ()， 5% Triton X100。 1 STE： ， 10mmol/L TrisCl()， 1mm
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