質(zhì)粒提取方法ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 18:24本頁面
【正文】 X100和能消化細胞壁的溶菌酶緩沖液中，然后加熱到 100℃ 使其裂解。但是，閉環(huán)質(zhì)粒 DNA彼此不會分離，這是因為他們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結(jié)構(gòu)，當溫度下降后，閉環(huán) DNA的堿基又各自就位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體核蛋白質(zhì)，就可從上清中回收質(zhì)粒 DNA 由于細菌染色體 DNA比質(zhì)粒大得多 ,受機械力后細菌染色體 DNA會被震斷成不同大小的線性片段而纏繞附著在細胞碎片上，并發(fā)生變性。但質(zhì)粒 DNA的復(fù)性要快于細菌染色體 DNA。 二、設(shè)備 微量取液器 (20μl,200μl,1000μl)， 臺式高速離心機，恒溫振蕩搖床， 高壓蒸汽消毒器 (滅菌鍋 )， 渦旋振蕩器， 電泳儀，瓊脂糖平板電泳裝置和 恒溫水浴鍋等。 LB固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中每升加 12g瓊脂粉 ,高壓滅菌。 溶菌酶溶液： 用 10mmol/L Tris 3mol/l NaAc ()： 50ml水中溶解 NaAc 溶液 Ⅰ ： 50 mmol/L 葡萄糖， 25 mmol/L ()， 10mmol/L EDTA ()。 溶液 Ⅱ ： mol/L NaOH (臨用前用 510mol/L NaOH母液稀釋 )， 1％ SDS。溶液終濃度為 : K+ 3mol/L, Acˉ 5mol/L。Cl(), 15mmol/L NaCl中 ,配成 10mg/ml的溶液 ,于 100℃ 加熱 15分鐘 ,使混有的 DNA酶失活。 飽和酚：市售酚中含有醌等氧化物 ,這些產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂及導(dǎo)致 RNA和 DNA的交聯(lián) ,應(yīng)在 160℃ 用冷凝管進行重蒸。Cl ()和 Tris 1 氯仿 :按氯仿 :異戊醇＝ 24:1體積比加入異戊醇。 按體積/體積＝ 1:1混合上述飽和酚與氯仿即得酚 /氯仿 (1:1)。 1 TE緩沖液： 10 mmo/L Tris高壓滅菌后儲存于 4℃ 冰箱中。Cl()， 10 mmol/L EDTA ()， 5% Triton X100。Cl()， 1mmol/L
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