質(zhì)粒提取方法ppt課件-展示頁
2025-05-12 18:24本頁面
【正文】 并使蛋白質(zhì)和染色體DNA變性。 閉合環(huán)狀的質(zhì)粒 DNA，在變性后不會分離，復(fù)性快； DNA雙鏈 變性 DNA單鏈 復(fù)性 強堿 中性 染色體 線性 DNA和或 有缺口 的質(zhì)粒DNA變性后雙鏈分離，難以復(fù)性而形成纏繞的結(jié)構(gòu)，與蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物結(jié)合在一起，在離心的時候沉淀下去。盡管在這項的條件下共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA也會變性，但兩條互補鏈彼此互相盤繞，仍會緊密結(jié)合在一起。 實驗原理： 堿變性原理 ： 根據(jù)共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒 DNA與線性DNA在拓撲學上的差異來分離。 實驗?zāi)康模? 學會小量制備質(zhì)粒 DNA的堿裂解方法、 煮沸法、小量一步提取法這三種質(zhì)粒 DNA的提取方法。如果質(zhì)粒 DNA兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂 ,分子就能旋轉(zhuǎn)而消除鏈的張力 ,形成松馳型的環(huán)狀分子 ,稱開環(huán) DNA(Open circular DNA, 簡稱 ocDNA)；如果質(zhì)粒 DNA的兩條鏈在同一處斷裂 ,則形成線狀DNA(Linear DNA)。 在細菌細胞內(nèi) ,共價閉環(huán)質(zhì)粒以超螺旋形式存在。質(zhì)粒三種提取方法的比較 基因工程原理與技術(shù)實驗部分： 質(zhì)粒 (Plasmid)是一種 染色體外的穩(wěn)定遺傳因子 ,大小從 1200kb不等 ,為雙鏈、閉環(huán)的 DNA分子 ,并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細胞中 。質(zhì)粒主要發(fā)現(xiàn)于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力 ,能在子代細胞中保持恒定的拷貝數(shù) ,并表達所攜帶的遺傳信息。在提取質(zhì)粒過程中，除了超螺旋 DNA外，還會產(chǎn)生其它形式的質(zhì)粒 DNA。當提取的質(zhì)粒 DNA電泳時 ,同一質(zhì)粒DNA其超螺旋形式的泳動速度要比開環(huán)和線狀分子的泳動速度快。 三種方法的比較，能夠根據(jù)不同的實驗?zāi)康倪x擇合適的方法。在 ?這個狹窄的范圍內(nèi)，線性 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而被變性。當加入 緩沖液使 pH恢復(fù)中性時，共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA復(fù)性快，而線性的染色體 DNA復(fù)性緩慢，經(jīng)過離心與蛋白質(zhì)和大分子 RNA一起沉淀下去。 變性 煮沸法： 將細菌懸浮于含 Triton
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