質(zhì)粒提取方法ppt課件(參考版)
2025-05-06 18:24本頁(yè)面
【正文】 ，室溫干燥沉淀 2min，然后加入 20μl無(wú)菌水溶解DNA。 ，加入 500181。 ，離心 5min，取上清移至另一個(gè) Eppendolf管中，加入 500181。沉淀 DNA 可用異丙醇 (一般使用等體積 ), 無(wú)水乙醇（ ）， 區(qū)別？ 。 2. 提取質(zhì)粒 DNA過(guò)程中除去蛋白很重要 ,采用酚 /氯仿去除蛋白效果較單獨(dú)用酚或氯仿好 ,要將蛋白盡量除干凈需多次抽提。 將沉淀溶于 2050μl 無(wú)菌水中，儲(chǔ)于 20℃ 冰箱中。 棄上清 ,將管口敞開(kāi)倒置于衛(wèi)生紙上使所有液體流出 ,加入 100ul 70％ 乙醇洗沉淀兩次。 上清液移入干凈 eppendorf管中 ,加入等體積的酚 /氯仿 (1:1),顛倒 混勻 , 4℃ 下 12022g離心 5分鐘，重復(fù)一次。 加入新配制的溶液 Ⅱ 300μl, 蓋緊管口，快速溫和顛倒 eppendorf管數(shù)次 ,以混勻內(nèi)容物 (千萬(wàn)不要振蕩 ),冰浴 5分鐘。 棄上清 ,將管倒置于衛(wèi)生紙上數(shù)分鐘 ,使液體流盡。 ? 12022g，離心 5min，棄上清液，用 70%乙醇洗滌兩次，然后將離心管倒扣在吸水紙上，使盡量干燥。 ? 加入 25μL溶菌酶 (10mg/mL)，放入沸水中 40s，立即于10 000r/min離心 10min。Cl()， 10 mmol/L EDTA ()， 5% Triton X100。 （一）、煮沸法 ? 將振蕩過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌 ，于 8 000r/min離心 1min，棄上清液。 二、 質(zhì)粒 DNA少量快速提取 質(zhì)粒 DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒 DNA十分有用。 操 作 步 驟 一、 細(xì)菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒菌種接種在 LB固體培養(yǎng)基 (含 50μg/ml Amp)中 , 37℃ 培養(yǎng) 1224小時(shí)。 1 電泳所用試劑： （ 1） TBE 緩沖液 (5 )：稱取 Tris 54g，硼酸 ，并加入 EDTA () 20ml，定溶至 100
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