質(zhì)粒dna的提取、酶切及檢測(cè)(參考版)
2025-05-29 18:28本頁(yè)面
【正文】 。 Relaxed circle Linearized form Supercoiled form 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 ? 根據(jù)觀察結(jié)果，繪圖。當(dāng)溴酚藍(lán)移動(dòng)到距離膠板下沿約 1～ 2cm處，停止電泳。 ? 待其凝固后，小心取下梳齒，備用。 共價(jià)閉環(huán)超螺旋 DNA（ cccDNA）＞ 直線 DNA（ LDNA， 2條鏈發(fā)生斷裂）＞開(kāi)環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA（ ocDNA， 1條鏈發(fā)生斷裂）。可以近似用于估算分子的大小。 相同堿基數(shù)量的雙鏈 DNA幾乎具有等量的凈負(fù)電荷，能以同樣的速度向正極方向移動(dòng)。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) DNA的方法和技術(shù)。 EB廢液要經(jīng)過(guò)處理才能丟棄 。 ? EB染料優(yōu)點(diǎn)：染色操作簡(jiǎn)便 ， 快速 ； 靈敏度高；可以加到樣品中或膠中 。 常用染料 ? EB:溴化乙錠 ， 能插入 DNA分子堿基對(duì)之間 。 核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關(guān)系 瓊脂糖濃度 線狀 DNA大小 /kb560 核酸構(gòu)型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關(guān)系 ? 不同構(gòu)型 DNA的移動(dòng)速度次序?yàn)椋汗矁r(jià)閉環(huán)超螺旋 DNA（ cccDNA）＞ 直線 DNA（ LDNA， 2條鏈發(fā)生斷裂）＞開(kāi)環(huán)的雙鏈環(huán)狀 DNA（ ocDNA， 1條鏈發(fā)生斷裂） 。 ? 質(zhì)粒量（ μl ） 緩沖液 (μl)* EcoR1 （ μl ） HindⅢ （ μl ） H2O (μl) 總體積（ μl ） I 8 2 0 0 10 20 II 8 2 1 0 9 20 III 8 2 0 1 9 20 置于 37℃ 水浴酶解 1小時(shí)。 三、實(shí)驗(yàn)操作 ? 加樣時(shí)，嚴(yán)格操作，做到準(zhǔn)確無(wú)誤。這種末端同樣可以通過(guò) DNA連接酶連接起來(lái)。 II型酶切割方式的另一種是在同一位置上切割雙鏈，產(chǎn)生平頭末端。 如 EcoRI的識(shí)別順序?yàn)椋? 5’…… G’AA|TT_C …… 3’ 3’…… C_TT|AA’G …… 5’ 垂直線表示中心對(duì)稱(chēng)軸 ， 從兩側(cè) “ 讀 ” 核苷酸順序都是GAATTC或 CTTAAG， 這就是回文順序 （ palin
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