質(zhì)粒dna的提取與酶切鑒定(參考版)
2025-05-29 18:28本頁(yè)面
【正文】 七、思考題 根據(jù) DNA限制酶的識(shí)別切割特性，催化條件及是否具有修飾酶活性可分為幾種類型？其中 II類限制性內(nèi)切酶有何特性？ 在用堿裂解法小量制備質(zhì)粒過(guò)程中 I液、 II液與 III液的作用是什么？ 。 酶解完成后，電泳檢測(cè)酶切結(jié)果。 溶液 II中的 NaOH與 SDS可裂解細(xì)胞，使 DNA變性以及 SDS使蛋白變性并形成交聯(lián)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 加入 150?l溶液 III, 加蓋后顛倒 67次混勻，冰上放置 2～ 3min； 溶液 III為低 pH的醋酸鉀緩沖液，中和 NaOH，以便使部分變性的閉環(huán)質(zhì)粒復(fù)性，而細(xì)菌染色體 DNA不能正確復(fù)性 12022 g離心 6 min，將上清移入另一干凈的 Ep管中； 加 2倍上清體積 (約 1mL)的無(wú)水乙醇 , 振蕩混勻，室溫放置 2min. 12022g離心 10min，棄上清液，再用 70％的乙醇洗滌一次， 12022g離心 1min，離心管倒置于吸水紙上扣干，然后在中空濃縮系統(tǒng)上干燥質(zhì)粒； 加入 40?L含 50 ?g/mL RNase A的滅菌蒸餾水或 TE 緩沖液溶解提取物，室溫放置直到質(zhì)粒完全溶解 (約 8min)，存于－ 20℃ 或直接用于酶切。 三 ． 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備： 超凈工作臺(tái) 、 電熱恒溫水浴 、 分光光度計(jì) 、 恒溫培養(yǎng)箱 、 恒溫振蕩器 、 移液器 、 微型離心管等 、
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