質(zhì)粒dna的提取酶切及濃度檢測(參考版)
2025-05-29 18:28本頁面
【正文】 1) 質(zhì)粒 DNA的酶解 4. 實驗方法和步驟 實驗結(jié)果 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 1. 未酶切質(zhì)粒； 2. EcoRI 單酶切； 3. EcoR1+Hind Ⅲ 雙酶切 M. DNA Marker. 。 置于 37℃ 水浴酶解 。雙酶切或多酶切時要考慮相容性緩沖液問題 ，一般公司會給用戶提供這方面的信息 。 緩沖液 因為不同的酶所要求的最適反應(yīng)條件不同 ， 所以一定要使用與酶相匹配的緩沖系統(tǒng) 。 平頭末端： 2) 影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素 (1) DNA的純度； (2) DNA的甲基化程度； (3) 酶切消化反應(yīng)的溫度； (4) DNA的分子結(jié)構(gòu)； (5) 溶液中離子濃度及種類； (6) 緩沖液的 pH值 。 _和‘ 表示在雙鏈上交錯切割的位置 II型酶切割方式的另一種是在同一位置上切割雙鏈，產(chǎn)生平頭末端。 這種酶的切割可以有兩種方式： 粘性末端；是交錯切割 ， 結(jié)果形成兩條單鏈末端 ， 這種末端的核苷酸順序是互補的 ， 可形成氫鍵 ， 所以稱為粘性末端 。 因此 ， 這種限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一 。 1)限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性 按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系以及切斷核酸的情況不同，分為三類： Ⅰ 型 Ⅱ 型 * Ⅲ 型 II型
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