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正文內(nèi)容

質(zhì)粒dna的提取酶切及濃度檢測(編輯修改稿)

2025-06-22 18:28 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 四、所有步驟必須在室溫下操作。 實驗操作步驟 ? 增殖細(xì)菌、擴增質(zhì)粒 ? 裂解菌體、獲取質(zhì)粒 ? 抽提質(zhì)粒、分離純化 ? 結(jié)果鑒定 對于未經(jīng)酶切的質(zhì)粒來說 , 常會出現(xiàn)兩條電泳帶 1) ( 松弛 ) 螺旋狀質(zhì)粒 DNA帶 2) 超螺旋狀質(zhì)粒 DNA的帶 以超螺旋狀質(zhì)粒 DNA居多 , 移動速度也最快 。 有時還會出現(xiàn)三條帶 , 其中一條是因為有一些質(zhì)粒 DNA在提取過程中遭到損傷而線性化 , 其移動速度介于螺旋狀和超螺旋狀質(zhì)粒 DNA之間 。 如果提取的質(zhì)粒很好時 , 這條帶會很弱 , 有時看不到 。 質(zhì)粒 DNA提取范例: 質(zhì)粒 DNA的酶切鑒定 1. 實驗?zāi)康暮鸵? 學(xué)習(xí)和掌握限制性內(nèi)切酶的特性、酶解操作方法,并理解限制性內(nèi)切酶是DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具。 2. 相關(guān)基礎(chǔ)知識 限制性核酸內(nèi)切酶:是一類能識別雙鏈 DNA分子特異性核酸序列的 DNA水解酶 。 是體外剪切基因片段的重要工具 , 所以常常與核酸聚合酶 、 連接酶以及末端修飾酶等一起稱為工具酶 。限制性核酸內(nèi)切酶不僅是 DNA重組中重要的工具 , 而且還可以用于基因組酶切圖譜的鑒定 。 1)限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性 按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系以及切斷核酸的情況不同,分為三類: Ⅰ 型 Ⅱ 型 * Ⅲ 型 II型 限制性內(nèi)切酶 能識別專一
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