實驗一植物組織總dna的提取及dna的濃度測定4學(xué)時(編輯修改稿)
2025-02-06 03:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 RNase)緩沖液，使DNA溶解，置于 37℃ 恒溫箱約 15 h，使 RNA消解；（ 15）置于 20℃ 保存、備用。南京曉莊學(xué)院生物實驗教學(xué)中心稱取樣品，液氮研磨，加入預(yù)熱的 (65℃ ) CTAB及 β巰基乙醇 保溫 1h,期間不停的搖均吸取上清液 ,移至新的離心管中 ,加入等體積氯仿：異戊醇（ 24： 1），輕緩顛倒混勻 ,10000rpm,10min 取上清液，移至新的離心管中 ,加等體積氯仿：異戊醇 ,顛倒混勻 , 10000rpm,10min取上清液，加入 （預(yù)冷），后 4 ℃ /20 ℃ 保溫沉淀10000rpm,10min離心取沉淀， 70%乙醇清洗兩次，吹干用 TE溶解 DNA,然后低溫保存南京曉莊學(xué)院生物實驗教學(xué)中心 取提取的 DNA溶液 2 181。l(約 100200 ng)至一干凈的離心管，加入 198 181。l蒸餾水稀釋。先 200 181。l蒸餾水至比色杯，進行紫外光空白測定，然后倒掉蒸餾水，加入 200 181。l已稀釋的 DNA溶液，測定 260 nm及 280 nm的光吸收值（ OD260及OD280），計算 DNA濃度及 OD260/OD280比值。計算公式如下 : dsDNA=50(OD260) 稀釋倍數(shù)以上濃度單位為 ?g /ml2. DNA濃度的測定南京曉莊學(xué)院生物實驗教學(xué)中心（ 1）葉片磨得 越細越好 。（ 2）移液器的使用。（ 3）由于植物細胞中含有大量的 DNA酶 ，因此，除在抽提液中加入 EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作應(yīng) 迅速 ，以免組織解凍，導(dǎo)致細胞裂解，釋放出DNA酶，使 DNA降解。六、注意事項南京曉莊學(xué)院生物實驗教學(xué)中心七、作業(yè)(1)本實驗所得的植物總 DNA制劑中含有哪些遺傳物質(zhì)？(2) 在 DNA抽提過程中造成 DNA分子斷裂的主要因素有哪些 ?(3) 本實驗中所用到下列試劑的作用各是什么 ? CTAB, 氯仿 , 異丙醇 , 75%乙醇 , EDTA，巰基乙醇南京曉莊學(xué)院生物實驗教學(xué)中心靜夜四無 鄰 ，荒居舊
法律信息相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1