質(zhì)粒提取方法ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 18:24本頁面
【正文】 0ml。 1 STE： ， 10mmol/L Tris 1 STET： mol/L NaCl， 10mmol/L TrisCl ()， 1 mmol/L EDTA ()。酚和氯仿均有很強(qiáng)的腐蝕性，操作時(shí)應(yīng)戴手套。氯仿可使蛋白變性并有助于液相與有機(jī)相的分開 ,異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫。Cl()緩沖液反復(fù)抽提使之飽和并使其 pH值達(dá)到 ,因?yàn)樗嵝詶l件下DNA會分配于有機(jī)相。重蒸酚加入 ％的 8羥基喹啉 (作為抗氧化劑 ),并用等體積的 冷卻后用 eppendorf管分裝成小份保存于 20℃ 。 RNA酶 A母液：將 RNA酶 A溶于 10mmol/L Tris 溶液 Ⅲ ： 5 mol/L KAc 60ml，冰醋酸 ， H2O ，定容至100ml, 并高壓滅菌。 溶液 Ⅰ 可成批配制 ,每瓶 100ml,高壓滅菌 15分鐘 ,儲存于 4℃ 冰箱。3H2 O,用冰醋酸調(diào) pH至 , 加水定容至 100ml, 分裝后高壓滅菌 ,儲存于 4℃ 冰箱。Cl()溶液配制成 10mg/ml,并分裝成小份 (如 )保存于 20℃ ,每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。 氨芐青霉素 (Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液 , 20℃ 保存?zhèn)溆谩? 三、試劑 LB液體培養(yǎng)基 (LuriaBertani) ：稱取蛋白胨 (Tryptone)10 g，酵母提取物 (Yeast extract) 5 g， NaCl 10 g，溶于 800ml去離子水中，用 NaOH調(diào)pH至 , 加去離子水至總體積 1升 ,高壓下蒸氣滅菌 20分鐘。 小量一步提取法： 從細(xì)菌中分離質(zhì)粒 DNA的方法都包括3個(gè)基本步驟 : 培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增 收集和裂解細(xì)胞 分離和純化質(zhì)粒 DNA 材料、設(shè)備及試劑 一、材料 含卡那酶素的 E. coli DH5α， (又稱eppendorf管 ), 離心管架。同樣受機(jī)械力質(zhì)粒DNA會變性，機(jī)械力后復(fù)性。加熱除了破壞細(xì)胞壁外，還有助于解開DNA鏈的堿基配對，
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