《質(zhì)粒提取方法》ppt課件(文件)
【正文】 配制的溶液 Ⅱ 300μl, 蓋緊管口，快速溫和顛倒 eppendorf管數(shù)次 ,以混勻內(nèi)容物 (千萬不要振蕩 ),冰浴 5分鐘。 棄上清 ,將管口敞開倒置于衛(wèi)生紙上使所有液體流出 ,加入 100ul 70％ 乙醇洗沉淀兩次。 2. 提取質(zhì)粒 DNA過程中除去蛋白很重要 ,采用酚 /氯仿去除蛋白效果較單獨用酚或氯仿好 ,要將蛋白盡量除干凈需多次抽提。 ，離心 5min，取上清移至另一個 Eppendolf管中，加入 500181。 ，室溫干燥沉淀 2min，然后加入 20μl無菌水溶解DNA。 ，加入 500181。沉淀 DNA 可用異丙醇 (一般使用等體積 ), 無水乙醇（ ）， 區(qū)別？ 。 將沉淀溶于 2050μl 無菌水中，儲于 20℃ 冰箱中。 上清液移入干凈 eppendorf管中 ,加入等體積的酚 /氯仿 (1:1),顛倒 混勻 , 4℃ 下 12022g離心 5分鐘，重復(fù)一次。 棄上清 ,將管倒置于衛(wèi)生紙上數(shù)分鐘 ,使液體流盡。 ? 加入 25μL溶菌酶 (10mg/mL)，放入沸水中 40s，立即于10 000r/min離心 10min。 （一）、煮沸法 ? 將振蕩過夜培養(yǎng)的細(xì)菌 ，于 8 000r/min離心 1min，棄上清液。 操 作 步 驟 一、 細(xì)菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒菌種接種在 LB固體培養(yǎng)基 (含 50μg/ml Amp)中 , 37℃ 培養(yǎng) 1224小時。 1 STE： ， 10mmol/L TrisCl ()， 1 mmol/L EDTA ()。氯仿可使蛋白變性并有助于液相與有機相的分開 ,異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫。重蒸酚加入 ％的 8羥基喹啉 (作為抗氧化劑 ),并用等體積的 RNA酶 A母液：將 RNA酶 A溶于 10mmol/L Tris 溶液 Ⅰ 可成批配制 ,每瓶 100ml,高壓滅菌 15分鐘 ,儲存于 4℃ 冰箱。Cl()溶液配制成 10mg/ml,并分裝成小份 (如 )保存于 20℃ ,每一
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