實驗五質(zhì)粒提取ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-26 00:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 origin 49775432167。 從細菌中分離質(zhì)粒 DNA 的方法都包括 3 個基本步驟：培養(yǎng)細菌使質(zhì)粒擴增；收集和裂解細胞；分離和純化質(zhì)粒 DNA。167。 采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁，十二烷基磺酸鈉 (SDS) 可使細胞膜裂解，細菌染色體 DNA 會纏繞附著在細胞碎片上，同時由于細菌染色體 DNA 比質(zhì)粒大得多，易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。當(dāng)用強熱或酸、堿處理時，細菌的線性染色體 DNA 變性 ,而共價閉合環(huán)狀 DNA(Covalently closed circular DNA，簡稱 cccDNA)的兩條鏈不會相互分開，當(dāng)外界條件恢復(fù)正常時，線狀染色體 DNA 片段難以復(fù)性，而是與變性的蛋白質(zhì)和細胞碎片纏繞在一起，而質(zhì)粒 DNA 雙鏈又恢復(fù)原狀，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解狀態(tài)存在于液相中。w 堿法提取主要是利用共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓撲學(xué)上的差異來分離它們，在堿性 pH， DNA變性，恢復(fù)中性時，線性染色體 DNA不能準(zhǔn)確復(fù)性，與其它大分子共沉淀，而質(zhì)粒 DNA卻可以準(zhǔn)確復(fù)性，留在上清中。w 幾乎所有純化質(zhì)粒的方法都用到質(zhì)粒 DNA分子相對較小和共價閉合環(huán)狀這兩個特性。167。 在細菌細胞內(nèi)，共價閉環(huán)質(zhì)粒以超螺旋形式存在。在提取質(zhì)粒過程中，除了超螺旋 DNA 外，還會產(chǎn)生其它形式的質(zhì)粒 DNA。如果質(zhì)粒 DNA 兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂 ,分子就能旋轉(zhuǎn)而消除鏈的張力，形成松馳型的環(huán)狀分子，稱開環(huán)DNA(Open circular DNA，簡稱 ocDNA)；如果質(zhì)粒 DNA 的兩條鏈在同一處斷裂，則形成線狀DNA(Linear DNA)。當(dāng)提取的質(zhì)粒 DNA 電泳時，同一質(zhì)粒 DNA 其超螺旋形式的泳動速度要比開環(huán)和線狀分子的泳動速度快。材料、設(shè)備及試劑一、材料 含 pUC19 的 E. coli DH5α菌株， 塑料離
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