實(shí)驗(yàn)五質(zhì)粒提取ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-26 00:10 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 origin 49775432167。 從細(xì)菌中分離質(zhì)粒 DNA 的方法都包括 3 個(gè)基本步驟：培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增；收集和裂解細(xì)胞；分離和純化質(zhì)粒 DNA。167。 采用溶菌酶可以破壞菌體細(xì)胞壁，十二烷基磺酸鈉 (SDS) 可使細(xì)胞膜裂解，細(xì)菌染色體 DNA 會(huì)纏繞附著在細(xì)胞碎片上，同時(shí)由于細(xì)菌染色體 DNA 比質(zhì)粒大得多，易受機(jī)械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。當(dāng)用強(qiáng)熱或酸、堿處理時(shí)，細(xì)菌的線性染色體 DNA 變性 ,而共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA(Covalently closed circular DNA，簡(jiǎn)稱(chēng) cccDNA)的兩條鏈不會(huì)相互分開(kāi)，當(dāng)外界條件恢復(fù)正常時(shí)，線狀染色體 DNA 片段難以復(fù)性，而是與變性的蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片纏繞在一起，而質(zhì)粒 DNA 雙鏈又恢復(fù)原狀，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解狀態(tài)存在于液相中。w 堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離它們，在堿性 pH， DNA變性，恢復(fù)中性時(shí)，線性染色體 DNA不能準(zhǔn)確復(fù)性，與其它大分子共沉淀，而質(zhì)粒 DNA卻可以準(zhǔn)確復(fù)性，留在上清中。w 幾乎所有純化質(zhì)粒的方法都用到質(zhì)粒 DNA分子相對(duì)較小和共價(jià)閉合環(huán)狀這兩個(gè)特性。167。 在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒以超螺旋形式存在。在提取質(zhì)粒過(guò)程中，除了超螺旋 DNA 外，還會(huì)產(chǎn)生其它形式的質(zhì)粒 DNA。如果質(zhì)粒 DNA 兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂 ,分子就能旋轉(zhuǎn)而消除鏈的張力，形成松馳型的環(huán)狀分子，稱(chēng)開(kāi)環(huán)DNA(Open circular DNA，簡(jiǎn)稱(chēng) ocDNA)；如果質(zhì)粒 DNA 的兩條鏈在同一處斷裂，則形成線狀DNA(Linear DNA)。當(dāng)提取的質(zhì)粒 DNA 電泳時(shí)，同一質(zhì)粒 DNA 其超螺旋形式的泳動(dòng)速度要比開(kāi)環(huán)和線狀分子的泳動(dòng)速度快。材料、設(shè)備及試劑一、材料 含 pUC19 的 E. coli DH5α菌株， 塑料離
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