核酸提取經(jīng)驗(yàn)及原理總結(jié)(編輯修改稿)
2024-08-21 10:31 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 IT、 GuHCl 等 ) 的裂解方法，是抽提 RNA 的首選 。 ? 含 CTAB 的裂解液，幾乎成為富含多糖的樣品，如細(xì)菌、植物的基因組 DNA 抽提的首選裂解方法。 ? SDS 堿裂解法是質(zhì)粒抽提的首選裂解方法，具有快速、得率高、幾乎無(wú)基因組 DNA 污染的特點(diǎn)。 細(xì)胞裂解 樣品與裂解液的比例 ? 裂解液的用量原則是：確保能徹底裂解樣品，同時(shí)使裂解體系中核酸的濃度適中。濃度過(guò)低，將導(dǎo)致沉淀效率低，影響得率；濃度過(guò)高，去除雜質(zhì)的過(guò)程復(fù)雜且不徹底，導(dǎo)致純度下降。另外，裂解液的用量是以樣品中蛋白質(zhì)的含量為基準(zhǔn)的，而不是以核酸含量為基準(zhǔn)，這一點(diǎn)務(wù)必牢記。 核酸提取 ? 提取是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過(guò)程。 DNA提取的幾種方法 ? 1 濃鹽法 ? 2 陰離子去污劑法 ? 4 水抽提法 ? 3 苯酚抽提法 RNA提取 ? 總 RNA的試劑盒快速提取 ? 蛋白酶－熱酚法 ? 氯化鋰法提取總 RNA 核酸純化 方法 ? 經(jīng)典的使用苯酚 /氯仿抽提的純化技術(shù) ? 使用離子交換介質(zhì)的純化技術(shù) ? 密度梯度離心法 ? 使用吸附介質(zhì)的純化技術(shù) 核酸純化 純化方法評(píng)價(jià) ? 針對(duì)不同的用途，選擇不同的純化方法，任何一種方法他都有其優(yōu)缺點(diǎn)，在試驗(yàn)中，沒(méi)有錯(cuò)誤的方法，只是選擇的方法不正確。 核酸純化 醇的沉淀 ? 沉淀的原理目的 ? 沉淀劑的選擇 ? 沉淀溫度的選擇 核酸純化 醇的沉淀 目的 ? 目的是使核酸從裂解體系中沉淀下來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)核酸與其它雜質(zhì) –主要是鹽的分離。 核酸純化 醇的沉淀 沉淀劑 ? 醇沉淀使用異丙醇還是乙醇，我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這二者對(duì)質(zhì)量有大的影響，雖然許多人“發(fā)現(xiàn)”乙醇沉淀的核酸純度更高。異丙醇沉淀的核酸比較緊湊，帖壁緊，顏色不是很白；乙醇沉淀的核酸比較蓬松，容易從壁上移動(dòng)，顏色比較白。這是現(xiàn)象，提示結(jié)論：異
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