質(zhì)粒dna的提取和鑒定(1)-資料下載頁
2025-04-30 06:49本頁面
【正文】 5 mm； 水平電泳系統(tǒng) 4. 室溫下靜置 1小時左右，凝膠固化。將帶凝膠的膠床置于電泳槽中，并使樣品孔位于電場負極； 5. 向電泳槽中加入 1 TAE電泳緩沖液，越過凝膠表面即可； 6. 輕輕拔出固定在凝膠中的梳子； 7. 樣品準(zhǔn)備：向核酸樣品中加入約為樣品體積 1/6的上樣緩沖液，用加樣器輕輕混勻； 8. 上樣：用加樣器吸取樣品，輕輕的加入到凝膠的樣品孔中，加樣量為 10 181。l ； 9. 蓋上電泳槽，接通電源，開始電泳； 10. 電泳條件：電壓 80v；時間 20～ 25分鐘； 11. 電泳結(jié)束后，切斷電源，取出凝膠。 12. 電泳結(jié)果分析： ① 紫外檢測儀直接觀察電泳條帶 ② 攝影記錄 預(yù)期實驗結(jié)果 kb kb 2 kb Marker 6 Kb 注意事項 1. 電泳前，確認樣品孔位于電場負極； 2. 因 EB存在，全部操作過程要帶防護手套； 3. 凝膠濃度選擇根據(jù)樣品 DNA分子大小而定，所以電泳前應(yīng)對 DNA片段大小有粗略的估計。 瓊脂糖凝膠濃度與 DNA分子的有效分離范圍 膠濃度（％） 線性 DNA分子大小（ kb） 5～ 60 1～ 20 ～ 10 ～ 7 ～ 6 ～ 4 ～ 3 質(zhì)粒的測序鑒定 ? 為了檢查插入載體的外源片段是否與原來基因的序列一致，或發(fā)生突變的是否改變編碼區(qū)的讀框，是否發(fā)生兩種性質(zhì)差別較大的氨基酸替代，最好的方法是測序。 ? 現(xiàn)在有很多生物公司有此項服務(wù)，可將菌體或提取的質(zhì)粒郵寄過去，一個星期內(nèi)就可獲得測序結(jié)果。 ? 可用生物軟件 Chromas查看測序結(jié)果，軟件 DNAMAN分析序列比對，觀看插入載體的外源片段是否與原基因序列一致。 觀看測序結(jié)果的軟件 Chromas 軟件運行界面 打開一個測序結(jié)果 峰型排列良好，無高大雜峰，說明測序結(jié)果可靠 將測序結(jié)果輸出為文本文件 DNAMAN軟件運行界面 “Sequence”－” Alignment”－” Mutiple Sequence Alignment” 從文件夾中打開序列文件 采用默認比對參數(shù) 注意出現(xiàn)不平整的地方 第三部分，設(shè)計性實驗部分 為了研究一個基因的功能，常用過表達或敲除的方法， 1. 列舉目前常用的真核表達載體，并對其中一個載體的構(gòu)件進行詳細的說明； 2. 列舉將載體轉(zhuǎn)染至細胞中的方法，并分析它們的優(yōu)缺點； 3. 列舉常用的 RNA干擾載體，轉(zhuǎn)染后細胞的篩選； 實驗設(shè)計
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