dna提取原理和方法-資料下載頁
2025-05-10 10:02本頁面
【正文】 NaOH ： 溶解細(xì)胞， DNA變性 SDS ： (1)溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜。 (2)解聚細(xì)胞中的核蛋白。 (3)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。 SDS與 NaOH聯(lián)用： 增強(qiáng) NaOH的強(qiáng)堿性 SDS堿裂解法提取質(zhì)粒 DNA中溶液的成分及作用 SDS堿裂解法提取質(zhì)粒 DNA中溶液的成分及作用 溶液 Ⅲ Neutralization Buffer 成分 ： 3M KAc / 2M HAc KAc : K+置換了 SDS中的 Na+，得到 PDS沉淀 HAc : 中和 NaOH,使 DNA復(fù)性 吸附柱 Spin Column with Collection Tubes ? 結(jié)構(gòu)： 特殊硅基質(zhì)吸附材料，特異性吸附 DNA，而 RNA與蛋白質(zhì)穿過。 高鹽低 pH值結(jié)合核酸，低鹽高 pH值洗脫。 大提 amp。小提 區(qū)別： 1. 大提可以用于大量菌液的提取， 100ml500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般 。 、異丙醇（回收沉淀核酸）、 LiCl（特異性去除 RNA）、含一定量 PEG的氯化物（回收質(zhì)粒 DNA）及乙酸銨等，其作用及目的都是有利于細(xì)菌的裂解和質(zhì)粒的純化，所以大提的產(chǎn)物比小提的量多很多，而且純度很高。 ，大提用于質(zhì)粒的大量提取和轉(zhuǎn)染等純度要求很高的實(shí)驗(yàn)。 * 內(nèi)毒素的去除 ? 內(nèi)毒性也稱為脂多糖或 LPS，是革蘭氏陰性胞膜上一種成分，細(xì)菌外膜的外部脂質(zhì)完全由內(nèi)毒素分子組成。 ? 包含疏水區(qū)域也包含了親水和帶電區(qū)域，從而賦予其與其它分子相互作用的獨(dú)特性質(zhì)。 ? 細(xì)菌在其活躍生長(zhǎng)時(shí)表面的內(nèi)毒素成分較少，而一旦其死亡則會(huì)釋放大量?jī)?nèi)毒素。在質(zhì)粒提取的裂解過程中，內(nèi)毒素會(huì)從細(xì)菌的外膜釋放到裂解液中。 ? 內(nèi)毒素會(huì)對(duì)原代細(xì)胞的 DNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)生嚴(yán)重影響，同樣也會(huì)影響培養(yǎng)細(xì)胞的敏感性，內(nèi)毒素水平增加可導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率的大幅下降。 原理 ? 染色體 DNA比質(zhì)粒 DNA分子大得多，且染色體 DNA為 線狀分子，而質(zhì)粒 DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子； ? 當(dāng)加熱處理 DNA溶液時(shí)，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒 DNA在冷卻時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象； ? 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過離心將兩者分開。 ? 煮沸法 ? 是利用物質(zhì)比重的不同分離混合物的一種方法。 ? 將待分離物質(zhì)置于均勻介質(zhì)（蔗糖）中，以一定的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，比重大的物質(zhì)優(yōu)先沉降，比重小的卻處于上層，從而得以分離。 ? 差速離心法 Thank you !
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